[发明专利]一种眼斑拟石首鱼的抗虫肽及其基因克隆方法和应用

权利要求书

1.眼斑拟石首鱼的抗虫肽piscidin的cDNA全长序列，其特征在于其核苷酸序列记为序列1，所述序列1为：

ttctcttact gagaatacag tctacagtct acagactatc catcagtgaa aggatgaagt     60

gtactgcggt ctttcttgtg ttgttcatgg tcgttctcat ggctgaacct ggagagtgta    120

tctggggact gatcgcccat ggagtcgcgc atgttggttc gttgatccat gggcttgtca    180

atgggaacca tggcgggaac caggcggagg agcagcagga gcagctcaac aaacgttcac    240

tttcttatga ccacccgtag gagcttcaac ggcgagactg aagatgaagc aacgtcagaa    300

agaaacgtgt ctatgaactg gtggaaacac ttcttgaaaa tatatatacg atttcaagtc    360

agttgttcag aataaatttg gatctcagca catcaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa    420

aaa                                                                  423。

2.眼斑拟石首鱼抗虫肽piscidin的氨基酸序列，其特征在于记为序列2，所述序列2为：

Met Lys Cys Thr Ala Val Phe Leu Val Leu Phe Met Val Val Leu Met

        -20                 -15                 -10

Ala Glu Pro Gly Glu Cys Ile Trp Gly Leu Ile Ala His Gly Val Ala

    -5              -1  1               5                   10

His Val Gly Ser Leu Ile His Gly Leu Val Asn Gly Asn His Gly Gly

                15                  20                  25

Asn Gln Ala Glu Glu Gln Gln Glu Gln Leu Asn Lys Arg Ser Leu Ser

            30                  35                  40

Tyr Asp His Pro。

3.如权利要求2所述的眼斑拟石首鱼抗虫肽piscidin的氨基酸序列，其特征在于所述氨基酸序列组成的多肽包含信号肽、成熟肽和优势域三个部分。

4.如权利要求2所述的眼斑拟石首鱼抗虫肽piscidin的氨基酸序列，其特征在于所述成熟肽序列，即抗虫肽，是编码22个氨基酸，具有两亲性α螺旋结构，含有碱性氨基酸，具体的序列命名为So-Piscidin：Ile Thr Gly Leu Ile Ala His Gly Val Ala His Val Gly Ser Leu Ile His Gly Leu Val Asn Gly。

5.眼斑拟石首鱼piscidin的cDNA全长序列的克隆方法，其特征在于包括以下步骤：

1)利用刺激隐核虫感染眼斑拟石首鱼，诱导并提高抗虫肽piscidin的表达水平；

2)利用感染后鳃部出现明显“白点”的眼斑拟石首鱼的头肾提取总RNA，然后反转录成cDNA作为PCR模板，此模板能有效扩增出抗虫肽的cDNA或片段；

3)参考鱼类piscidin的cDNA序列设计同源引物，利用RT-PCR和RACE等技术，克隆眼斑拟石首鱼piscidin的cDNA全长序列。

6.眼斑拟石首鱼的抗虫肽piscidin在制备防治刺激隐核虫病药物中的应用。