[发明专利]犬瘟热弱毒疫苗株F和H基因重组新城疫病毒活载体疫苗的构建及其应用

权利要求书

1.一种表达犬瘟热病毒融合蛋白(F)或犬瘟热病毒血凝素蛋白(H)的重组新城疫LaSota弱毒疫苗，其中优选所述犬瘟热病毒融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，优选所述犬瘟热病毒血凝素蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。

2.根据权利要求1的重组新城疫LaSota弱毒疫苗，其中编码所述犬瘟热病毒融合蛋白的基因的序列如SEQ ID No.2所示，和/或编码所述犬瘟热病毒血凝素蛋白的基因的序列如SEQ ID No.4所示。

3.根据权利要求1或2的重组新城疫LaSota弱毒疫苗，其中通过反向遗传操作技术在新城疫LaSota弱毒疫苗中表达所述犬瘟热病毒融合蛋白(F)或犬瘟热病毒血凝素蛋白(H)，优选用于表达所述犬瘟热病毒融合蛋白(F)或犬瘟热病毒血凝素蛋白(H)的新城疫LaSota弱毒疫苗是AV1615。

4.根据权利要求1-3中任何一项的重组新城疫LaSota弱毒疫苗，其为rLa-CDVR-F或rLa-CDVR-H。

5.根据权利要求1-4中任何一项的重组新城疫LaSota弱毒疫苗在制备预防犬瘟热和/或新城疫的疫苗中的应用。

6.一种生产权利要求1-4中任何一项的重组新城疫LaSota弱毒疫苗的方法，该方法包括：

(1)构建转录质粒，该转录质粒包括其中插入编码犬瘟热病毒融合蛋白(F)或犬瘟热病毒血凝素蛋白(H)的基因的新城疫LaSota弱毒疫苗的基因组cDNA序列，优选所述新城疫LaSota弱毒疫苗是AV1615；

(2)构建一个或多个转录辅助质粒，该辅助质粒包括编码所述新城疫LaSota弱毒疫苗的核蛋白(NP)的cDNA序列、编码所述新城疫LaSota弱毒疫苗的磷酸蛋白(P)的cDNA序列、和编码所述新城疫LaSota弱毒疫苗的大聚合酶蛋白(L)的cDNA序列；

(3)将所述转录质粒和转录辅助质粒共转染所述新城疫LaSota弱毒疫苗复制许可的宿主细胞，培养转染后的宿主细胞；和

(4)收获上清液，过滤后继续敏感细胞传代或接种鸡胚尿囊腔拯救重组病毒株，

其中优选所述犬瘟热病毒融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，优选所述犬瘟热病毒血凝素蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示；更优选其中编码所述犬瘟热病毒融合蛋白的基因的序列如SEQ ID No.2所示，和/或编码所述犬瘟热病毒血凝素蛋白的基因的序列如SEQ ID No.4所示。

7.根据权利要求6的方法，其中所述转录质粒是pBRN-FL-F或pBRN-FL-H，和/或所述转录辅助质粒分别是质粒pBS-NP、pBS-P和pBS-L。

8.根据权利要求6-7中任何一项的方法制备的重组新城疫LaSota弱毒疫苗。

9.根据权利要求1-4中任何一项的重组新城疫LaSota弱毒疫苗在制备疫苗中的应用，所述疫苗用于受试者针对犬瘟热的加强免疫，优选所述受试者已经用犬瘟热病毒(CDV)弱毒疫苗首次免疫，更优选所述受试者选自由犬科动物、鼬科动物、浣熊科动物和猫科动物组成的组，最优选犬科动物，特别是犬；还优选所述疫苗是通过滴鼻或肌肉注射对所述受试者进行免疫。

10.用于预防犬瘟热和/或新城疫的试剂盒，其在相同或不同包装或容器中包括：(a)犬瘟热病毒(CDV)弱毒疫苗；(b)根据权利要求1-4中任何一项的重组新城疫LaSota弱毒疫苗，优选为rLa-CDVR-F、rLa-CDVR-H或它们的混合物；和任选地(c)使用说明书，优选(a)和(b)是在试剂盒中的不同包装或容器中，其中所述使用说明书指示(a)用于首次免疫，(b)用于加强免疫。