[发明专利]新城疫病毒和鸭瘟病毒二重PCR检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及新城疫病毒和鸭瘟病毒二重PCR检测试剂盒。

背景技术

新城疫(Newcastle Diseases，简称ND)和鸭瘟(Duck Plague，简称DP)均常见于鸭、鹅等雁行目禽类的急性、败血性和高度接触性传染病，这两种疾病流行广泛，传播迅速，发病率和死亡率高，均是目前对世界范围水禽危害最为严重的疫病之一。给水禽业带来巨大的经济损失。这两种疾病呈急性败血症过程中都侵害神经系统，同时出现呼吸道症状，排绿色粪便，其临床表现、病理变化、流行病学等方面都十分相似，这两种疾病发生时，很容易混淆。目前对NDV和DPV的鉴别诊断主要依靠传统的病原分离鉴定与血清学试验，但这些方法存在诊断时间长，特异性差，敏感性低，而且操作繁琐等的缺点，不利于快速诊断这两种疾病。

PCR检测方法由于具有敏感性高、特异性好、快速、简便等特点，已被广泛应用于各种禽病病原体的检测。二重PCR是一种特殊的PCR形式，其突出特点是，一次PCR反应，能同时检测并鉴别出两种病原体，在临床上具有很高的应用价值。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测新城疫病毒和鸭瘟病毒的引物组。

本发明提供的引物组，由引物1、引物2、引物3和引物4组成；

所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的核苷酸序列分别依次为序列表中的序列1、序列2、序列3和序列4。

上述引物组中，所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的摩尔比为(0.1-0.2)∶(0.1-0.2)∶(1.5-2)∶1.87；

所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的摩尔比具体为0.13∶0.13∶1.87∶1.87。

本发明的另一个目的是提供一种检测新城疫病毒和鸭瘟病毒的PCR试剂。

本发明提供的PCR试剂，由上述的引物组、PCR缓冲液和水组成；

所述引物组中的引物1在所述PCR试剂中的终浓度具体为0.1-0.2μmol/L；

所述引物组中的引物2在所述PCR试剂中的终浓度具体为0.1-0.2μmol/L；

所述引物组中的引物3在所述PCR试剂中的终浓度具体为1.5-2μmol/L；

所述引物组中的引物4在所述PCR试剂中的终浓度具体为1.5-2μmol/L。

所述引物组中的引物1在所述PCR试剂中的终浓度进一步具体为0.13μmol/L；

所述引物组中的引物2在所述PCR试剂中的终浓度进一步具体为0.13μmol/L；

所述引物组中的引物3在所述PCR试剂中的终浓度进一步具体为1.87μmol/L；

所述引物组中的引物4在所述PCR试剂中的终浓度进一步具体为1.87μmol/L。

上述PCR缓冲液购自天根，产品目录号为KT201。

本发明的第三个目的是提供一种检测新城疫病毒和鸭瘟病毒的PCR试剂盒。

本发明提供的PCR试剂盒，包括上述的引物组或上述PCR试剂。

上述的引物组或上述PCR试剂或上述试剂盒在制备检测和/或辅助检测待测样品中是否含有新城疫病毒和/或鸭瘟病毒产品中的应用也是本发明保护的范围；

或上述的引物组或上述PCR试剂或上述试剂盒在检测和/或辅助检测待测样品中是否含有新城疫病毒和鸭瘟病毒中的应用。

上述应用为用上述的引物组或上述PCR试剂或上述试剂盒对所述待测样品进行二重PCR扩增。

上述应用中，所述二重PCR扩增的退火温度为50℃-55℃，所述二重PCR扩增的退火温度具体为55℃。

上述二重PCR扩增的模板为待测样本的cDNA或DNA。

本发明的第四个目的是提供一种检测新城疫病毒的引物对A。

本发明提供的引物对A，由上述的引物组中的所述引物1和所述引物2组成。

本发明的第五个目的是提供一种检测鸭瘟病毒的引物对B。

本发明提供的引物对B，由上述的引物组中的所述引物3和所述引物4组成。

含有上述引物对A的PCR试剂A或试剂盒A是本发明保护的范围；

含有上述引物对B的PCR试剂B或试剂盒B也是本发明保护的范围。

上述的引物对A或上述的PCR试剂A或试剂盒A在制备检测和/或辅助检测待测样品中是否含有新城疫病毒产品中的应用是本发明保护的范围。