[发明专利]一种同时检测玉米和花生中四种真菌毒素的悬浮芯片检测方法

说明书

技术领域

本发明提供一种可以同时检测四种真菌毒素(包括黄曲霉毒素Bl、呕吐毒素、T-2毒素和玉米赤霉烯酮)的悬浮芯片方法，特别是涉及一种同时检测玉米和花生中多种真菌毒素的悬浮芯片检测技术。 

背景技术

真菌(Fungi)是一类有细胞壁，不含叶绿素，无根叶茎，以腐生或寄生方式生存，能进行有性或无性繁殖的微生物。真菌毒素(Mycotoxin)也称霉菌毒素，是某些真菌产生的代谢产物或二级代谢产物，目前已知的就有350多种不同的真菌毒素。通常，真菌毒素污染粮食作物和动物饲料，进入生物链后，不仅可导致农产品霉败变质、营养成分损失以及产品品质降低，甚至具有致癌、致畸和致突变等严重危害，并且还有肝细胞毒性、中毒性肾损害、生殖紊乱以及免疫抑制等特性。由此可见，真菌毒素可对食品安全和人类健康构成严重威胁。现在，随着人类对健康和食品安全的高度重视，对真菌毒素的研究也显得越来越迫切和重要。 

至今为止，国内外对这块的研究主要集中在农产品及饲料中对人类危害较大的十几种真菌毒素上，其中包括黄曲霉毒素(主要是黄曲霉毒素Bl和Ml，即Aflatoxin B1和Aflatoxin M1，简称为AFB1和AFM1)、呕吐毒素(又名脱氧雪腐镰刀菌烯醇，即Deoxynivalenol，DON)、T-2毒素(T-2toxin，T-2)、玉米赤霉烯酮(又名F-2毒素，即Zearalenone，ZEN)、赭曲霉毒素A(Ochratoxin A，OTA)、伏马菌毒素(Fumonisin，F)、展青霉素(Patulin，PTL)、串联镰刀菌毒素(Moniliformin，MF)、橘霉素(Citrinin，CIT)、单端孢霉烯族毒素(Trichothecenes，TS)等，它们一般同时具有毒性强和污染频率高等特点。据此，本发明所研究的靶标物为四种真菌毒素，即AFB1、DON、T-2和ZEN。 

目前，国内外检测真菌毒素常用的方法主要是高效液相色谱法(HPLC)和酶联免疫吸附法(ELISA)，前者虽检测灵敏度高，但样品前处理繁琐、操作复杂、耗时长，所需设备也较昂贵；后者操作简便、快速，但每次只能完成一种真 菌毒素的检测，对于多种毒素的检测不仅费时、费力，工作量也比较大。 

悬浮芯片技术(Suspension array technology，SAT)是1997年美国Luminex公司开发研制的多功能液相芯片分析平台，因液相芯片中所有的反应都是在悬浮于液相环境中的微球表面上进行而得名，又称液相芯片(Liquid array/chip)，全名为多功能多指标同步分析体系(Flexible Multiple Analyte Profiling，xMAP)或多功能悬浮点阵(Multi-Analyte Suspension Array，MASA)。该技术是唯一被美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于临床诊断的新型生物芯片产品，集激光技术、微流体技术、快速信号处理和数据分析系统等技术于一体，已被广泛应用于生物医学、食品安全等领域。 

悬浮芯片的检测原理是基于一种直径为5.6μm的聚苯乙烯微球，微球上带有两种荧光物质，根据这两种荧光物质浓度配比的不同，可以将微球分成100种(Luminex公司最新的技术是通过对三种不同的荧光物质进行配比，可以将微球分成500种)。在微球的表面可以偶联不同的基团分子，例如羧基、羟基、生物素、链霉亲和素等，以适应于对不同探针分子和微球的偶联。当不同的探针分子和相应编号的微球偶联之后，将这些微球混合在一个反应管中，加入待检样品，就可以实现对不同靶分子的同时检测。反应完成之后，加入带有报告荧光分子的二抗或者相应的物质，然后上机检测。悬浮芯片仪通过识别多种微球的编号从而定性地分析待检的靶分子，然后通过识别结合在微球上的报告荧光从而实现定量地分析多种靶标物。本发明还以谷类作物中的玉米、以油料作物中的花生为代表物，实现了应用悬浮芯片方法同时检测四种真菌毒素的目的。 

本发明所研究的一种同步检测四种真菌毒素的悬浮芯片技术，具有高通量、多功能性、操作简便、重复性好、灵敏度高、准确性高等优点，适用于对真菌毒素小分子污染物的快速定量检测，在环境与食品安全有毒有害物质的检测领域具有广阔的应用前景。 

发明内容

本发明的目的是针对现有检测方法存在的缺陷，提供一种操作简单、灵敏快速准确的四种真菌毒素的悬浮芯片检测技术。 

本发明的另一个目的是提供一种同步检测四种真菌毒素的悬浮芯片检测技术，以及基于此所建立的在玉米和花生中同时对四种真菌毒素的定量检测方法。 

本发明的技术方案概述如下：