[发明专利]用于检测转基因玉米MIR162的特异性引物、探针及其应用

权利要求书

1.一种用于检测转基因玉米MIR162的特异性引物，其特征在于：所述引物由上游引物和下游引物组成，其序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

2.权利要求1所述的用于检测转基因玉米MIR162的特异性引物在定性检测玉米及其相关产品是否含有MIR162转化事件中的应用。

3.权利要求1所述的用于检测转基因玉米MIR162的特异性引物在SYBR Green I实时荧光定量PCR检测玉米及其相关产品是否含有MIR162转化事件中的应用。

4.一种用于检测转基因玉米MIR162的荧光标记探针，其特征在于：所述探针的序列如SEQ ID NO.3所示，探针的5′端连接一个荧光报告集团FAM，3′端连接有一个荧光淬灭集团Eclipse。

5.权利要求1所述的用于检测转基因玉米MIR162的特异性引物及权利要求4所述的用于检测转基因玉米MIR162的荧光标记探针在TaqMan探针实时荧光定量PCR检测玉米及其相关产品是否含有MIR162转化事件中的应用。

6.一种定性检测玉米及其相关产品是否含有MIR162转化事件的方法，其特征在于：步骤为：

(1)提取待检测样品的基因组DNA，并以此为模板，利用MIR162-F和MIR162-R引物组合进行PCR扩增；

(2)PCR扩增产物以琼脂糖凝胶电泳分离，EB染色后鉴定是否存在扩增产物；若存在扩增产物，则待检测样品中含有MIR162转化事件；若不存在扩增产物，则待检测样品中不含有MIR162转化事件。

7.一种SYBR Green I实时荧光定量PCR检测玉米及其相关产品是否含有MIR162转化事件的方法，其特征在于：步骤为：

(1)建立MIR162转化体特异性引物的SYBR Green I实时荧光定量PCR标准曲线和zSSIIb基因的SYBR Green I实时荧光定量PCR标准曲线：

①提取转基因玉米MIR162标准品基因组DNA进行梯度稀释，然后向各稀释液中加入MIR162转化事件的特异性引物，以及zSSIIb基因的国家标准引物，进行扩增；

②扩增后，测定各稀释液中相关荧光标记物的Ct值，该Ct值与拷贝数的自然对数呈线性关系，据此绘制MIR162转化事件的定量PCR标准曲线和zSSIIb基因的定量PCR标准曲线；

(2)提取待检测样品基因组DNA，得基因组DNA提取液，然后向基因组DNA提取液中加入MIR162基因的特异性引物，以及zSSIIb基因的国家标准引物，进行扩增；扩增后，测定基因组DNA提取液中相关荧光标记物的Ct值，然后根据上述绘制的MIR162基因的定量PCR标准曲线和zSSIIb基因的定量PCR标准曲线，计算出相应的拷贝数，则转基因玉米MIR162基因的拷贝数与玉米内标准基因zSSIIb基因的拷贝数之比，即为待检测样品中转基因玉米MIR162的百分含量。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)①和(2)中，扩增的参数如下：扩增反应体积为20uL，2×Premix Ex Taq(Rox)10uL，浓度为10umol/L的Forward primer 0.4uL，浓度为10umol/L的Reverse primer 0.4uL，ddH2O 8.2uL，DNA模板1uL；扩增反应条件：95℃10min预变性；95℃15s，50℃30s，72℃30s，在72℃收集荧光信号，共计40个循环。