[发明专利]一种制备阿卡波糖的方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种制备阿卡波糖的方法。

技术背景

阿卡波糖是有效的葡糖苷酶抑制剂，用作口服治疗糖尿病的抗糖尿病药物，通过游动放线菌（Actinoplanes utahensis）的发酵培养获得。阿卡波糖的分子结构如下式，由4个单糖组成，其生物合成主要是糖代谢，发酵培养基中的碳源（糖源）组成十分关键。阿卡波糖发酵的最大特点是，生产菌的生产力显著依赖于培养液的渗透压浓度（制备阿卡波糖的渗透控制的发酵方法，专利公 开 号：CN1178837，拜尔公司），渗透压的控制主要通过维持培养液中高浓度底物来实现，糖源就是其中最需要控制的。糖源的质量是发酵水平高低和杂质控制的关键，培养液中的糖源主要是复合型麦芽糖和葡萄糖，相对而言，复合型麦芽糖要求维持高浓度，而葡萄糖控制在较低水平。

 

对于工业生产，成本是优先考虑的，麦芽糖是阿卡波糖发酵培养基组成中最多的一种营养成份，直接购买饴糖、高麦芽糖浆，成本比较高。同时，我们也做过考查，购买的饴糖、高麦芽糖浆，直接用于游动放线菌的发酵培养，产物阿卡波糖的浓度并不高，尤其是纯麦芽糖的效果更差。阿卡波糖发酵需要复合型的麦芽糖，以麦芽二糖、麦芽三糖为主，辅以少量麦芽四糖和葡萄糖，复合麦芽糖含量越高，发酵水平相对越高，发酵液中的杂质，尤其是关键杂质A的含量也易于控制在较低水平（杂质A目前没有好的提取方法去除，主要通过发酵控制）。复合麦芽糖需采用淀粉液化糖化制备，液化糖化工艺不同，得到的复合麦芽糖含量差异非常大，直接关系到阿卡波糖的发酵水平和杂质含量。本发明将淀粉经过多种酶液化、糖化，得到高含量复合麦芽糖，不需其它处理，灭菌后直接用于阿卡波糖发酵生产，是最有效、最经济的生产方式。

发明内容

本发明的目的是针对上述现状，提供一种经济有效且产物纯度较高的制备阿卡波糖的方法。

本发明采取的技术方案：

一种制备阿卡波糖的方法，其具体步骤为：

（1）淀粉液化：将淀粉加水搅拌溶解，配制成20-40%（w/v）的乳液，调pH到5.5-6.2，加入淀粉质量0.05-0.2%的耐高温a-淀粉酶和0.02-0.08%无水氯化钙，加热到105-110℃，维持5-10分钟，DE值达到10-18时，降温至60℃得液化液；

（2）糖化：将步骤（1）获得的液化液，加入所述淀粉质量0.05-0.2%的普鲁兰酶、0.05-0.2%的真菌酶、0.25-0.45%的β-淀粉酶，55-60℃维持4－8小时，得糖化液；

（3）灭菌后发酵：步骤（2）获得的淀粉糖化液，直接加入其他营养物质制成阿卡波糖发酵培养基，灭菌后接入阿卡波糖生产菌种游动放线菌进行发酵，发酵过程中控制发酵培养液中总糖含量为6.0-12.0%（w/w），葡萄糖含量不超过2.8%（w/w），发酵培养5-6天，发酵液经提取制得阿卡波糖。

所述淀粉的含糖量为70-85%（w/w）。

本发明采用上述技术方案取得的有益效果是：

采用本发明的方法通过多种酶对淀粉（含糖量在70-85%）进行液化、糖化，淀粉转化为复合麦芽糖的转化率可达85-95%，用于阿卡波糖发酵生产，发酵水平高；关键杂质A含量低，减少了下游的提取纯化压力；淀粉代替其它糖源，生产成本更低。

本发明公开的制备阿卡波糖的方法，是一种适合阿卡波糖发酵的高产量、低杂质、低成本的生产技术。

具体实施方式

    下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。

部分试验在丽珠集团新北江制药股份有限公司完成。

实施例1