[发明专利]V5抗原表位融合性酵母表达载体及构建方法

权利要求书

1.一种酵母细胞表达载体，其特征在于该表达载体具有V5抗原表位，V5抗原表位可通过柔性短肽Gly-Ile-与下游基因相融合，将该载体命名为pGPDV5。

2.如权利要求1所说的酵母表达载体pGPDV5，其特征在于V5抗原表位DNA可在酵母强启动子GPD的驱动下与下游的外源性基因进行融合表达，且不会影响下游基因表达产物的生物活性。

3.一种酵母表达载体pGPDV5的构建方法，是：

1）以Invitrogen公司的pYestrp2载体为基本框架，通过PCR方法从酵母基因组扩增酵母强启动子GPD，并经Swa I和BamH I两酶切位点，将其插入到pYestrp2载体中，构建成GPD驱动的酵母表达载体，命名为pGPD；

2）人工合成两条V5抗原表位DNA单链，

正链为5′-gatccATGGGTAAGCCTATCCCTAACCCTCTCCTCGGTCTCGATTCTACAGg-3′；

反链为5′-aattcCTGTAGAATCGAGACCGAGGAGAGGGTTAGGGATAGGCTTACCCATg-3′；

3）将所合成的V5抗原表位DNA用退火缓冲配成5umol/L，等体积混合，常规退火形双股，将插入到pGPD的相应酶切位点，构建成可与V5抗原表位相融合的酵母表达载体pGPDV5。