[发明专利]一种抗癌新药氟莱哌素的定量测定方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药检测技术领域，具体涉及一种抗癌新药氟莱哌素的定量测定方法。

背景技术

在药物分析检测中，常用的方法有高效液相色谱法(HPLC)、离子交换色谱一紫外检测法、质谱分析法、液相色谱串联质谱法、气相色谱串联质谱法等，其中液相色谱串联质谱法将高效液相色谱的高分离效能力与质谱的强大结构测定功能组合起来，使其成为医药、化工等领域中最重要的方法之一。

氟莱哌素是一种1.1类新型抗癌药物，具有高效、广谱、低毒、低成本的特点，目前处于临床I期研究阶段，而国内外文献中对氟莱哌素检测方法的报道很少见，在液相色谱串联质谱法分析操作中将氟莱哌素稀释液直接打进质谱无响应，无法对氟莱哌素进行定量测定。大鼠体内药动学(L.Gu，L.Li，Z.Chen，H.Pan，H.Jiang，S.Zeng，X.Xu，H.An.J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci.，2008(868)：77)研究报道过一种方法，为高效液相色谱检测方法，但是最低测定限(LOQ)为50ng/ml，灵敏度太低。

发明内容

本发明提供了一种抗癌新药氟莱哌素的定量测定方法，操作简便，准确度高，灵敏、可靠，检测限低，结果重现性好。

一种抗癌新药氟莱哌素的定量测定方法，包括对氟莱哌素的全血样品依次进行预处理和液相色谱串联质谱法检测分析，所述的预处理为向氟莱哌素的全血样品中加入乙醚、内标溶液和NaF饱和水溶液(室温)，再进行冷冻离心，取冷冻离心的上清液于室温下氮气吹干，用AgNO₃溶液复溶后进行离心分离，取离心分离的上清液作为液相色谱串联质谱法的样品。

所述的全血样品与内标溶液的体积比为10∶1。

所述的全血样品与NaF饱和水溶液的体积比为1∶1.5。

在实际操作中，并不严格限定乙醚的用量，为使全血样品中待测组分得到更好的分散，所述的全血样品与乙醚的体积比优选为1∶10。

所述的冷冻离心的上清液与AgNO₃溶液的体积比为10∶1。

所述的内标溶液为浓度为8.600ng/ml的对苯三硫醚的甲醇溶液，以提高分析结果的准确度。

所述的液相色谱串联质谱法检测分析的条件为：

(1)液相色谱分离

液相色谱的流动相由体积比为85∶15的流动相A与流动相B组成，流动相A为甲醇，流动相B为体积分数为0.05％的甲酸的水溶液，流速为0.6ml/min；色谱柱为ZORBAX SB-C18液相色谱柱；进样量为10μl；

(2)质谱检测

大气压电喷雾离子源，多重反应选择离子监测，阳离子电离模式：

碰撞气：41.38kPa，气帘气：103.45kPa，离子喷雾电压：4500V；干燥气温度：400℃；离子源气体1：448.28kPa，离子源气体2：275.86kPa；

氟莱哌素母离子[M₁+Ag]⁺及子离子测定为m/z 421.1→357.0，离子去簇电压：72V，入口电压：10V，碰撞能：27V，碰撞室出口电压：4V；

内标对苯三硫醚母离子[M₂+Ag]⁺及子离子测定为m/z 384.9→263.0，离子去簇电压：72V，入口电压：10V，碰撞能：25V，碰撞室出口电压：10V；

所述的色谱柱为不锈钢填充柱，内径为3.0mm，长度为150mm，粒径为3.5μm。

所述的AgNO₃溶液是由所述的流动相配制的，浓度为0.01mol/L，以避免在后续的液相色谱串联质谱法检测分析中基线不稳造成无法判断杂质峰。

本发明对全血样品进行预处理时所采用的乙醚如无特殊说明均为零摄氏度的乙醚。

本发明建立了全血中氟莱哌素的液质联用检测方法，本发明方法对氟莱哌素样品的检测的专一性强，灵敏度高，操作方便，各项方法学指标均能达到中国药典的相关技术要求；本发明方法检测结果准确可靠，检测限低，可达到0.4ng/ml。

附图说明

图1为本发明氟莱哌素标准样品的一级全扫描质谱图。

图2为本发明内标对苯三硫醚的一级全扫描质谱图。

图3为本发明氟莱哌素标准样品的二级全扫描质谱图。

图4为本发明内标对苯三硫醚的二级全扫描质谱图。

图5a为本发明实施例2测试空白全血中氟莱哌素的色谱图。