[发明专利]基于LAMP的微生物目视化荧光显色基因检测方法无效
| 申请号： | 201210047714.9 | 申请日： | 2012-02-28 |
| 公开（公告）号： | CN102586438A | 公开（公告）日： | 2012-07-18 |
| 发明（设计）人： | 王业富;卢暄;郑虎 | 申请（专利权）人： | 武汉大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;G01N21/64 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 黄瑞棠 |
| 地址： | 430071*** | 国省代码： | 湖北;42 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 lamp 微生物 目视 荧光 显色 基因 检测 方法 | ||
1.一种基于LAMP的微生物目视化荧光显色基因检测方法，其特征在于包括下列步骤：
①用缓冲蛋白胨水(BPW)按照国标法培养待检样品4h；
②用水煮法从待测样品中提取DNA；
③将DNA加入到LAMP反应体系中，65℃保温1h；
④通过与对照组比较，肉眼观察待测样品结果，对样品进行定性分析。
所述LAMP反应体系包括LAMP反应液和荧光显色剂；
a)LAMP反应液
LAMP反应液由LAMP 10×buffer 2.5μl，20μmol/L内引物FIP、BIP各2.0μl，20μmol/L外引物F3、B3各1.0μl，25mmol/L dNTPs 3.0μl，50mmol/L MgSO43.0μl，1.0mol/L甜菜碱5μl，Bst DNA聚合酶大片段1.0μl，无菌双蒸水2.0μl组成，反应液总体积22.5μl；
b)荧光显色剂
荧光显色剂是由10μmol/L-20mmol/L的钙黄绿素1μl和60μmol/L-0.1mol/LMnCl20.5μl组成。
2.按权利要求1所述的一种基于LAMP的微生物目视化荧光显色基因检测方法，其特征在于：
沙门氏菌外引物序列Sal F3，如SEQ NO.1所示；
沙门氏菌外引物序列Sal B3，如SEQ NO.2所示；
沙门氏菌内引物序列Sal FIP，如SEQ NO.3所示；
沙门氏菌内引物序列Sal BIP，如SEQ NO.4所示；
标准阳性模板pMD18-T-invA质粒包含沙门氏菌invA基因，如SEQ NO.5所示。
3.按权利要求1所述的一种基于LAMP的微生物目视化荧光显色基因检测方法，其特征在于：
志贺氏菌外引物序列Shi F3，如SEQ NO.6所示；
志贺氏菌外引物序列Shi B3，如SEQ NO.7所示；
志贺氏菌内引物序列Shi FIP，如SEQ NO.8所示；
志贺氏菌内引物序列Shi BIP，如SEQ NO.9所示；
标准阳性模板pMD18-T-ipaH质粒包含志贺氏菌ipaH基因，如SEQ NO.10所示。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于武汉大学，未经武汉大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201210047714.9/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
