[发明专利]改善基于叶酸类化合物的受体型靶向制剂靶向效果的方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物制剂领域，具体涉及一种增加基于叶酸类化合物的主动靶向制剂中靶向基团即叶酸类化合物基团在外水相的分布，进而改善制剂主动靶向效果的方法。

背景技术

叶酸(FA)可还原为四氢叶酸，后者是一碳单位转移酶的辅酶，参与一碳单位代谢和嘌呤、胸腺嘧啶的从头合成。叶酸受体在正常组织中的表达高度保守，只在肺、肾、脉络膜和胎盘中有低至中等水平表达，且以β亚型为主，但在大部分恶性肿瘤中，如卵巢癌、子宫内膜癌、前列腺癌、肾癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌和鼻咽癌中均高度表达，有时可比正常组织高出100～300倍，且正常组织中叶酸受体主要定位于极化上皮尖端表面，血循环中叶酸复合物无法与其接触。迄今为止的研究结果表明，叶酸通过其羧基与药物载体系统连接形成叶酸复合物后，其与细胞表面受体亲和力基本保持不变，克服了递药系统在生理状态下难以穿透细胞膜的问题，确保了通过叶酸介导将递药系统输送至肿瘤细胞内。叶酸作为肿瘤细胞的寻靶分子，具有无免疫源性、易于修饰和价廉易得等优势，已成为介导递药系统主动靶向肿瘤的研究热点之

Yuan H等制备了叶酸偶联的紫杉醇脂质体，改善了制剂的细胞摄取，但其直接将叶酸与脂肪酸相连接，中间没有聚乙二醇链，制成的脂质体在体内代谢过快，不具备长循环脂质体延缓药物代谢、增加体内循环时间的特点，较大程度的影响了药效的发挥。

基于叶酸的靶向制剂经过多年的改进，现一般通过亲水性直链高分子将叶酸分子间接连接在制剂表面而获得受体型靶向制剂，该方法弥补了普通制剂靶向性不足、易被网状内皮系统中巨噬细胞膜表面Fc受体识别而被迅速从循环系统清除的缺点，为将药物高比例导入肿瘤细胞内提供了一种较为实用的抗肿瘤药物靶向载体。Robert J.Lee等把叶酸接在与类脂结合的PEG分子远端，使其从脂质体上灵活地伸展，进而将FA-PEG-脂质体复合物导入靶细胞。该制剂可作为传送化疗药物的有效载体，但该方法制备脂质体，叶酸基团在制备过程中会因为自身的疏水性被包埋于脂质体磷脂双分子层之间，进而降低制剂的主动靶向能力。

Pedro M制备了PLGA-PEG-FA修饰的纳米粒，发现只有20％的叶酸基团位于纳米粒外水相中，其它80％则包覆于纳米粒的疏水内核中，证明叶酸基团本身的疏水性极大的影响了其在主动靶向制剂上的应用。制剂制备过程中虽然可以通过增加靶向材料的投料量来增加暴露在水相的叶酸靶头的绝对数目，但是一方面靶向材料成本较高，另外，因为前期插入制剂主体的靶向材料会通过其PEG链或其他亲水链的空间位阻阻碍后期靶向材料的插入，所以靶向材料的修饰量并不能随意增加。因此，如何便捷高效的提高叶酸基团在外水相的分布比例，目前已成为国内外基于叶酸的主动靶向制剂研究中亟待急待解决的问题。

中国专利(申请号201110114306.6)首先用磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-叶酸制备胶束，然后制备普通脂质体并将两者共同孵育，使胶束的磷脂酰乙醇胺基团即磷脂基团插入脂质体的外层磷脂层，该融合过程可使叶酸基团分布在脂质体外，进而更好的发挥叶酸的靶向能力。该专利较好的解决了叶酸受体靶向制剂经典修饰方法中叶酸基团大部分被包覆于制剂疏水内核、无法暴露进而影响与靶细胞表面受体发生相互作用的问题，但该专利存在制备工艺繁琐和孵育时磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-叶酸的磷脂酰乙醇胺基团即磷脂基团插入脂质体效率有限的问题。同时孵育法通用性非常有限，孵育法要求待修饰制剂主体表面为亲水性和半固态，且靶向材料必须含有与制剂表面材料结构完全相同或者具有高度亲和力的基团才能方便其插入、融合，以该专利为例，如果用于连接叶酸基团的聚乙二醇链或其它亲水链另一端连接的不是磷脂而是其他两亲性材料或者疏水性材料，则存在该材料与脂质体磷脂层的亲和性不强甚至无法插入的问题，如果制剂表面为疏水性，制剂系统仅仅通过制剂个体间电荷斥力或其它作用力保持物理稳定，或者制剂主体表面为固态，不具备恰当的流动性，则孵育法根本不能用于主动靶向制剂的修饰，因为后插入这一关键过程根本无法实现。

发明内容

本发明公开了一种增加基于叶酸的主动靶向制剂中靶向基团在外水相的分布，进而改善制剂主动靶向效果的方法。

本发明的主要特点为在基于叶酸类化合物的主动靶向制剂制备过程中，含叶酸基团的靶向材料和形成制剂主体的脂质或高分子材料同时投料，共同参与制剂主体的自发形成，以弱碱性碱溶液作为外水相，从本质上大幅增加叶酸类化合物基团的亲水性，进而使其在制剂主体自发形成过程中主动分布于外水相，避免其因自身的疏水性被包埋于制剂主体的疏水部位，最终达到增强叶酸介导的主动靶向效果的作用。