[发明专利]一种获得抗真菌病害植物的方法

说明书

技术领域

本发明属于基因工程领域，涉及一种获得抗真菌病害植物的方法。

背景技术

棉花黄萎病是由大丽轮枝菌引起的棉花病害，也是制约我国棉花生产的主要病害。黄萎病菌能够在短时间内引起棉花产生枯黄、萎蔫的病状，造成棉苗大面积死亡，致使农民遭遇减产甚至绝收。

利用传统的育种方法来进行抗病种质的筛选，不仅种质资源缺乏、周期长，而且还存在着抗病性不稳定等问题，难以取得突破性进展。因此，筛选抗病基因并研究其对黄萎病的抗病机制，利用基因工程手段，通过抗病基因的克隆和转化来改良棉花的黄萎病抗性，是棉花抗黄萎病育种的一个重要方向。

发明内容

本发明的目的是提供一种获得抗真菌病害植物的方法。

本发明提供了GhMLP1蛋白在调控植物抗病性中的应用；所述GhMLP1蛋白是如下(a)或(b)：

(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将序列表中序列1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物抗病性相关的由序列1衍生的蛋白质。

所述抗病可为抗真菌病害。所述真菌具体可为大丽轮枝菌(如大丽轮枝菌V991)或黑胫病菌(如烟草黑胫病菌)。所述植物可为单子叶植物或双子叶植物。所述双子叶植物具体可为烟草，如Nicotiana tabacum L.(cv.Petit havana SR1)。

本发明还提供了GhMLP1蛋白的编码基因在培育抗病植物中的应用；所述GhMLP1蛋白是如下(a)或(b)：

(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将序列表中序列1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物抗病性相关的由序列1衍生的蛋白质。

所述GhMLP1蛋白的编码基因为如下(1)或(2)或(3)或(4)或(5)所述的DNA分子：

(1)序列表中序列2自5’末端第57至527位核苷酸所示的DNA分子；

(2)序列表中序列2自5’末端第57至530位核苷酸所示的DNA分子；

(3)序列表中序列2所示的DNA分子；

(4)在严格条件下与(1)或(2)或(3)限定的DNA序列杂交且编码植物抗病相关蛋白的DNA分子；

(5)与(1)或(2)或(3)限定的DNA序列至少具有90％以上同源性且编码植物抗病相关蛋白的DNA分子。

所述严格条件为在0.1×SSPE(或0.1×SSC)、0.1％SDS的溶液中，65℃条件下杂交并洗膜。

所述抗病可为抗真菌病害。所述真菌具体可为大丽轮枝菌(如大丽轮枝菌V991)或黑胫病菌(如烟草黑胫病菌)。所述植物可为单子叶植物或双子叶植物。所述双子叶植物具体可为烟草，如Nicotiana tabacum L.(cv.Petit havana SR1)。

本发明还保护一种培育转基因植物的方法，是将GhMLP1蛋白的编码基因导入目的植物中，得到抗病性高于所述目的植物的转基因植物；所述GhMLP1蛋白是如下(a)或(b)：

(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将序列表中序列1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物抗病性相关的由序列1衍生的蛋白质。

所述GhMLP1蛋白的编码基因为如下(1)或(2)或(3)或(4)或(5)所述的DNA分子：

(1)序列表中序列2自5’末端第57至527位核苷酸所示的DNA分子；

(2)序列表中序列2自5’末端第57至530位核苷酸所示的DNA分子；

(3)序列表中序列2所示的DNA分子；

(4)在严格条件下与(1)或(2)或(3)限定的DNA序列杂交且编码植物抗病相关蛋白的DNA分子；

(5)与(1)或(2)或(3)限定的DNA序列至少具有90％以上同源性且编码植物抗病相关蛋白的DNA分子。

所述严格条件为在0.1×SSPE(或0.1×SSC)、0.1％SDS的溶液中，65℃条件下杂交并洗膜。

所述GhMLP1蛋白的编码基因可通过重组载体导入所述目的植物中。

携带有所述基因的重组载体可通过使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导、农杆菌介导、基因枪等常规生物学方法转化所述目的植物的细胞或组织。