[发明专利]一种从胶基中提取动植物基因组DNA的方法

说明书

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及一种从胶基或含胶基食品中提取动植物基因组DNA的方法。

背景技术

胶基食品，是一种含有水不溶性树胶、添加甜味和香味料的耐咀嚼性食品，其中以胶基糖为代表。胶基糖主要有口香糖和泡泡糖两大类。其中，胶基作为胶基糖中最基本的咀嚼物质，是胶基糖组成的重要部分，是一种无营养、不消化且不溶于水的热塑性物质，它在人体温度下可以呈现出各种适宜的咀嚼性能和成膜性能，在加热软化时具有巨大的粘着力，以葡萄糖浆作为介质，通过高效率的混合可以吸附大量的可溶性甜味料和香料等，用于承载甜味剂、香精以及任何其他想利用的物质。为了制作不同风味的泡泡糖和口香糖，常需在胶基成分中添加一定的如油脂等动植物成分。根据消费群体(如某些民族习惯)的需求，必须通过对胶基或含胶基食品中可能的动植物DNA组分进行检测以确定动植物成分的添加。而胶基不能溶于常规DNA提取试剂，故以常规的DNA提取方法不能对胶基中的动植物DNA组分进行提取以及后续的检测。迄今为止，也未见国内外有这方面的相关报道。

发明内容

本发明的目的是针对以上要解决的技术问题，提供一种操作简便、能够有效从胶基或含胶基食品中提取动植物基因组DNA的方法。

为达到上述目的，本发明提供了一种从胶基或含胶基食品中提取动植物基因组DNA的方法，包括以下步骤：

(A)样品前处理：将胶基或含胶基食品样品剪碎；

(B)样品中胶基成分的溶解：用三氯甲烷溶解经步骤(A)前处理后的样品，至饱和；

(C)胶基中极性成分的萃取：以CTAB提取液作为萃取剂，萃取经步骤(B)溶解后的胶基中的极性成分；

(D)提取样品中的DNA。

作为本发明的一种优选实施方式，在步骤(A)中，所述样品用量为10克。

作为本发明的一种优选实施方式，在步骤(B)中，用于溶解样品的三氯甲烷用量为15～20ml。

作为本发明的一种优选实施方式，在所述步骤(C)中，用于萃取的CTAB提取液的体积为15～20ml。

作为本发明的一种优选实施方式，在步骤(C)中，用等体积CTAB提取液连续两次萃取经步骤(B)溶解后胶基中的极性成分。

进一步，在所述步骤(C)中，加入15～20ml CTAB提取液至经步骤(B)溶解后的胶基中，充分震荡混匀，940×g室温离心5分钟.，取上层转移至另一50ml离心管。再次重复该操作。

作为本发明的一种优选实施方式，在所述步骤(D)中，提取样品中DNA的具体步骤如下：

(a)取离心后的上层清液，65℃水浴15分钟，加入RNA酶，37℃水浴15分钟；

(b)加入等体积酚/氯仿/异戊醇，振荡混匀后11000×g室温离心10分钟，小心取出上层清液，移至另一离心管，离心后，两相界面浑浊，加入等体积酚/氯仿/异戊醇至上层清液中，震荡混匀后，11000×g室温离心10分钟；

(c)加入核酸共沉淀剂混匀后，按1/10体积加入3MNaAc并混匀，加入等体积异丙醇，充分混匀，-20℃静置30～40分钟，28000×g 4℃离心10分钟，弃上清；

(d)向沉淀中加入600μl-20℃预冷的75％乙醇，快速混匀，28000×g 4℃离心5分钟，弃上清；

(e)将所得沉淀干燥15分钟，然后溶解沉淀。

进一步，所述步骤(e)中用50μl双蒸水溶解沉淀。

进一步，所述步骤(e)中用50μlTE缓冲液溶解沉淀。

与现有技术相比，本发明使用三氯甲烷溶解胶基，使其能够有效溶解，提取胶基或含胶基食品中的动植物DNA，有利于后续程序中采用生物工程技术手段，对所提取的胶基或含胶基食品中的动植物DNA成分进行检测，从而保证食品安全和环境保护。

附图说明

图1是A组胶基中猪源性成分实时荧光PCR检测图谱(含阳性参比、阴性参比、试剂空白)。图中，S1：A组胶基，P：猪肉作为阳性参比，N：大豆作为阴性参比，B：提取空白，TE：试剂空白。

图2是B组香口胶中猪源性成分实时荧光PCR检测图谱(含阳性参比、阴性参比、试剂空白)。图中，S2：B组香口胶，P：猪肉作为阳性参比，N：大豆作为阴性参比，B：提取空白，TE：试剂空白。

图3是C组胶基中高等植物内源基因实时荧光PCR检测图谱(含阳性参比、阴性参比、试剂空白)。图中，S1：C组胶基，P：大豆作为阳性参比，N：猪肉作为阴性参比，B：提取空白，TE：试剂空白。