[发明专利]一种从胶基中提取动植物基因组DNA的方法有效
| 申请号： | 201210041411.6 | 申请日： | 2012-02-22 |
| 公开（公告）号： | CN102533735A | 公开（公告）日： | 2012-07-04 |
| 发明（设计）人： | 刘津;李志勇;李丹宁;张隽;陈源树 | 申请（专利权）人： | 广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 广州新诺专利商标事务所有限公司 44100 | 代理人： | 华辉;刘婉 |
| 地址： | 510623 广东省广州*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 胶基中 提取 动植物 基因组 dna 方法 | ||
1.一种从胶基中提取动植物基因组DNA的方法，包括以下步骤：
(A)样品前处理：将胶基或含胶基食品样品剪碎；
(B)样品中胶基成分的溶解：用三氯甲烷溶解经步骤(A)前处理后的样品，至饱和；
(C)胶基中极性成分的萃取：以CTAB提取液作为萃取剂，萃取经步骤(B)溶解后的胶基中的极性成分；
(D)提取样品中的DNA。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤(A)中，所述样品用量为10克。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤(B)中，用于溶解样品的三氯甲烷用量为15～20ml。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(C)中，用于萃取的CTAB提取液的体积为15～20ml。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤(C)中，用等体积CTAB提取液连续两次萃取经步骤(B)溶解后胶基中的极性成分。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(C)中，加入15～20ml CTAB提取液至经步骤(B)溶解后的胶基中，充分震荡混匀，940×g室温离心5分钟.，取上层转移至另一50ml离心管。再次重复该操作。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(D)中，提取样品中DNA的具体步骤如下：
(a)取离心后的上层清液，65℃水浴15分钟，加入RNA酶，37℃水浴15分钟；
(b)加入等体积酚/氯仿/异戊醇混合液，该混合液中酚、氯仿、异戊醇的体积比为25∶24∶1，混合液的pH值≥7.5，振荡混匀后11000×g室温离心10分钟，小心取出上层清液，移至另一离心管，离心后，两相界面浑浊，加入等体积以上酚/氯仿/异戊醇混合液至上层清液中，震荡混匀后，11000×g室温离心10分钟；
(c)加入核酸共沉淀剂混匀后，按所得混合液1/10体积加入3M NaAc并混匀，加入等体积异丙醇，充分混匀，-20℃静置30～40分钟，28000×g 4℃离心10分钟，弃上清；
(d)向沉淀中加入600μl-20℃预冷的75％乙醇，快速混匀，28000×g 4℃离心5分钟，弃上清；
(e)将所得沉淀干燥15分钟，然后溶解沉淀。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述步骤(e)中用50μl双蒸水溶解沉淀。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述步骤(e)中用50μl TE缓冲液溶解沉淀。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，未经广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201210041411.6/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
