[发明专利]一种测定蔗汁中α-葡聚糖含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种测定蔗汁中α-葡聚糖含量的方法。

背景技术

α-葡聚糖是由肠膜明串珠菌利用蔗汁中的蔗糖发酵产生的多糖类物质，主链由α-D吡喃葡萄糖通过α-1-6糖苷键构成。当蔗汁中的α-葡聚糖含量达到一定程度时，其高粘性会引起蔗汁过滤、浓缩、结晶等后续操作困难，同时还造成糖分的大量损失。因此，定量分析蔗汁中的α-葡聚糖含量具有十分重要的现实意义。蔗汁中α-葡聚糖含量的测定方法，主要有罗伯特铜法、旋光法、酶解色谱法、抗体法等。罗伯特铜法需反复洗涤、多次过滤，操作步骤过多，结果误差大；旋光法与酶解色谱法测定需要专门的仪器，且适用于高α-葡聚糖含量的蔗汁；抗体法所必需的抗体价格昂贵，测定时需要配备专门的浊度仪。有些其他的方法则受蔗汁成分的影响较大，通常用于原糖或白糖中α-葡聚糖含量的检测，用于蔗汁中α-葡聚糖含量测定时，难以获得准确的结果。

发明内容

本发明的目的是提供一种测定蔗汁中α-葡聚糖含量的方法。

本发明所采取的技术方案是：

一种测定蔗汁中α-葡聚糖含量的方法，包括以下步骤：

1）空白对照蔗汁的制备：在蔗汁中加入淀粉酶与α-葡聚糖酶，充分反应，其中，蔗汁、淀粉酶、α-葡聚糖酶三者的体积比为2000:(1-1.5):(1-1.5)；

2）待测样品蔗汁的制备：在蔗汁中加入淀粉酶，充分反应，其中，蔗汁、淀粉酶两者的体积比为2000:(1-1.5)；

3）在步骤1）得到的蔗汁液体中加入浓度为8-12%的三氯乙酸与助滤剂，其中，三氯乙酸的加入量与步骤1）中的加入淀粉酶与α-葡聚糖酶之前的蔗汁体积比为0.3-0.4:1，将其混合均匀并过滤，并将得到的空白对照蔗汁滤液分成多份，向各份空白对照蔗汁滤液中加入α-葡聚糖溶液，使得各份滤液中的α-葡聚糖的含量呈梯度变化，再于其中分别加入无水乙醇，其中，无水乙醇与滤液的体积比为0.9-1.5:1；

4）工作曲线的绘制：测量步骤3）中得到的含α-葡聚糖的空白对照蔗汁滤液的浊度，以各滤液中的α-葡聚糖浓度同浊度值的关系作图，得到α-葡聚糖在在蔗汁中的工作曲线；

5）在步骤2）得到的蔗汁液体中加入浓度为8-12%的三氯乙酸与助滤剂，其中，三氯乙酸的加入量与步骤1）中的加入淀粉酶与α-葡聚糖酶之前的蔗汁体积比为0.3-0.4:1，将其混合均匀并过滤，再于其中分别加入无水乙醇，其中，无水乙醇与滤液的体积比为0.9-1.5:1，再测量滤液的浊度值；

6）利用步骤4）得到的工作曲线，结合上步得到的滤液的浊度值，换算出待测样品蔗汁中的α-葡聚糖含量。

步骤1）中，在加入淀粉酶与α-葡聚糖酶之前，蔗汁还经过100-200目筛过滤。

步骤2）中，在加入淀粉酶之前，蔗汁还经过100-200目筛过滤。

所述的助滤剂为硅藻土、珍珠岩、纤维素、石棉、活性炭、酸性白土、聚丙烯酰胺中的一种。

步骤1）中，反应时间为30-60mn，反应温度为60-70℃。

步骤2）中，反应时间为30-60mn，反应温度为60-70℃。

本发明的有益效果是：本发明的测试方法准确度较高。整个实验过程简便快捷，对实验设备要求低，适合在糖厂实时监测糖汁中的α-葡聚糖含量，该方法的建立为蔗汁中α-葡聚糖的测定提供了一个快速简便准确的新途径。

具体实施方式

一种测定蔗汁中α-葡聚糖含量的方法，包括以下步骤：

1）空白对照蔗汁的制备：在过100目筛的蔗汁（锤度15°Bx）中加入淀粉酶（novozymes 公司生产）与α-葡聚糖酶（阿玛诺天野酶制剂商贸（上海）有限公司提供），置于60℃水浴中反应30-60min，冷却至室温，其中，蔗汁、淀粉酶、α-葡聚糖酶三者的体积比为2000:(1-1.5):(1-1.5)，优选的，三者的体积比为200ml:100μl:100μl；

2）待测样品蔗汁的制备：在过100目筛的蔗汁（锤度15°Bx）中加入淀粉酶（novozymes 公司生产），置于60℃水浴中反应30-60min，冷却至室温，其中，蔗汁、淀粉酶两者的体积比为2000:(1-1.5)，优选的，两者的体积比为200ml:100μl；