[发明专利]人源糖基化改造的汉逊酵母

权利要求书

1.重组质粒甲，包括如下功能元件：UGnT基因的表达盒、MMN9基因和GnTI基因的表达盒、MNN2基因和GnTII基因的表达盒；所述UGnT基因如序列表的序列1自5’末端第548至1535位核苷酸所示；所述MMN9基因如序列表的序列1自5’末端第2438至2551位核苷酸所示；所述GnTI基因如序列表的序列1自5’末端第2558至3781位核苷酸所示；所述MNN2基因如序列表的序列1自5’末端第4685至4825位核苷酸所示；所述GnTII基因如序列表的序列1自5’末端第4832至5899位核苷酸所示。

2.如权利要求1所述的重组质粒甲，其特征在于：

所述UGnT基因的表达盒中，由序列表的序列1自5’末端第7至541位核苷酸所示的GAP启动子启动所述UGnT基因的表达，由序列表的序列1自5’末端第1559至1896位核苷酸所示的AOX1TT终止序列终止所述UGnT基因的表达；

所述MMN9基因和GnTI基因的表达盒中，由序列表的序列1自5’末端第1903至2437位核苷酸所示的GAP启动子启动所述MMN9基因和所述GnTI基因的表达，由序列表的序列1自5’末端第3806至4143位核苷酸所示的AOX1TT终止序列终止所述MMN9基因和所述GnTI基因的表达；

所述MNN2基因和GnTII基因的表达盒中，由序列表的序列1自5’末端第4150至4684位核苷酸所示的GAP启动子启动所述MNN2基因和所述GnTII基因的表达，由序列表的序列1自5’末端第5924至6261位核苷酸所示的AOX1TT终止序列终止所述MNN2基因和所述GnTII基因的表达。

3.如权利要求2所述的重组质粒，其特征在于：所述重组质粒甲如序列表的序列1所示。

4.重组菌乙，是将权利要求1至3中任一所述重组质粒甲以及重组质粒乙导入汉逊酵母得到的重组菌；所述重组质粒乙包括如下功能元件：MNN2基因和GnTII基因的表达盒、UGT基因的表达盒和UGalE基因的表达盒；所述UGalE基因如序列表的序列2自5’末端第1164至2231位核苷酸所示；所述UGT基因如序列表的序列2自5’末端第3601至4659位核苷酸所示；所述MNN2基因如序列表的序列2自5’末端第7975位核苷酸至8115位核苷酸所示；所述GnTII基因如序列表的序列2自5’末端第8122至9192位核苷酸所示。

5.如权利要求4所述的重组菌乙，其特征在于：

所述UGalE基因的表达盒中，由序列表的序列2自5’末端第623至1157位核苷酸所示的GAP启动子启动所述UGalE基因的表达，由序列表的序列2自5’末端第2256至2593位核苷酸所示的AOX1TT终止序列终止所述UGalE基因的表达；

所述UGT基因的表达盒中，由序列表的序列2自5’末端第2600至3600位核苷酸所示的PMA1启动子启动所述UGT基因的表达，由序列表的序列2自5’末端第4684至5021位核苷酸所示的AOX1TT终止序列终止所述UGT基因的表达；

所述MNN2基因和GnTII基因的表达盒中，由序列表的序列2自5’末端第7440至7974位核苷酸所示的GAP启动子启动所述MNN2基因和所述GnTII基因的表达，由序列表的序列2自5’末端第9220至9554位核苷酸所示的AOX1TT终止序列终止所述MNN2基因和所述GnTII基因的表达。

6.如权利要求5所述的重组菌乙，其特征在于：所述重组质粒乙如序列表的序列2所示。

7.权利要求4或5或6所述重组菌乙在制备人源糖基化蛋白中的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于：所述人源糖基化蛋白为具有如下糖苷结构的糖蛋白Gal₂GlcNAc₂Man₃GlcNAc₂。

9.重组菌甲，是将权利要求1至3中任一所述重组质粒甲导入汉逊酵母得到的重组菌。

10.权利要求9所述重组菌甲在制备糖蛋白中的应用；所述糖蛋白的糖苷结构为GlcNAc₂Man₃GlcNAc₂。