[发明专利]一种血小板生成素拟肽冻干制剂

说明书

技术领域

本发明涉及一种含有血小板生成素拟肽的冻干粉针，以及相应的制备工艺。

背景技术

慢性特发性血小板减少性紫癜（ITP）是一种自身性免疫性疾病，由致血小板减少的一种自身免疫反应引起，其特征是血小板数降低，其患者面临出血高风险，往往导致患者小血管出血，症状为淤青、鼻出血和牙龈出血，严重者可出现致命性胃肠道和脑内出血。目前治疗ITP的主要手段是使用免疫抑制类药物，如皮质类固醇、静注免疫球蛋白、抗D免疫球蛋白和Genentech公司产品利妥昔单抗，而对严重衰竭性病人的最后一着则是行脾切除术。其中大多数治疗药物未曾经历随机安慰剂对照临床试验的考察，虽对不同患者群均有效，但同时也会产生严重的毒副反应，其作用机制是阻止血小板破坏，而非促进血小板产生。

    血小板生成素（TPO）为一种糖蛋白，主要产生于肝脏，在巨核细胞及血小板的产生中起着重要的调节作用。其与c-Mpl结合后可激活下游信号级联反应，从而导致巨核细胞的分化和增值，且伴随着血小板水平升高。第1代促血小板生成剂-糖基化全长重组人血小板生成素（rhTPO）和聚乙二醇化重组人巨核细胞生长及发育因子（PEG-rHuMGDF）随之问世。其可促进健康受试者体内巨核细胞生成，并提高血小板数量，且在用于治疗癌症患者、免疫性血小板生成素减少性紫癜患者及接受非清髓性化疗的癌症患者的研究中均获得了成功。然而，第1代促血小板生成剂可能会导致受试者体内产生抗TPO抗体，因而具有诱发血小板减少症的风险，糖基化全长重组人血小板生成素（rhTPO）和聚乙二醇化重组人巨核细胞生长及发育因子（PEG-rHuMGDF）的开发被迫停止。此后研究人员在多肽文库中寻找随机、无相关性的多肽，企图可在不产生抗TPO抗体的情况下刺激依赖于TPO的细胞株；在尝试将筛选得到的多肽连接于各种载体分子，以增加其半衰期。由此开发出以血小板生成素拟肽为代表的第2代促血小板生成剂。血小板生成素拟肽在健康受试者及ITP患者中的试验均获得了成功，且试验中亦未见受试者体内产生抗TPO抗体。

   血小板生成素拟肽为一种新型重组蛋白，可特异性结合并激活血小板生成素（TPO）受体c-Mpl,从而显著提高血小板水平。血小板生成素拟肽含有两个相同的亚单位，每个亚单位分别由一个IgG1 Fc结构区和c-Mpl结合区共价结合构成，且与TPO无氨基酸序列同源性，故不会在用药者体内产生抗TPO抗体。血小板生成素拟肽的生产是利用基因工程技术构建出血小板生成素拟肽原核表达菌株，采用发酵工程技术实现了血小板生成素拟肽高密度发酵，通过蛋白质复性和纯化技术纯化出符合药用级别的血小板生成素拟肽原液，配制成制剂。主要用于治疗脾切除及非脾切除的成人免疫性血小板减少症。

    但是，蛋白质药物的生物学活性受多种环境因素的影响，可能发生多种物理或化学变化，例如聚合、氧化和降解等现象，从而大大丧失活性。因此我们选择了适合的剂型、辅料、生产工艺，通过控制关键的工艺条件，使制的的产品保持了很高的活性和稳定性。中试研究表明，产品制造工艺稳定，操作简单，周期短，成本低，适合产业化生产。

发明内容

本发明的目的是为了提供一种能稳定保存血小板生成素拟肽蛋白，并适合于实际临床使用的含有重组血小板生成素拟肽的冻干纷针。

    为达到发明目的，本发明采用的技术方案是：

    一种含有血小板生成素拟肽的冻干粉针，所述冻干粉针由血小板生成素拟肽与药用级稳定性辅料溶于pH5～6的缓冲液中得到，所述血小板生成素拟肽蛋白浓度为0.1～1mg/mL。

     血小板生成素拟肽原液由我公司制备，其制备方法在我公司申请的专利申请号为201110235281.5中已有详细记载，在此不再獒述。所述稳定性辅料可根据需要适当添加。本发明中优选稳定性辅料为甘露醇、甘氨酸和吐温80，优选甘露醇质量浓度为2-8%，更优选甘露醇质量浓度为5%。优选甘氨酸质量浓度为l-5％，更优选甘氨酸质量浓度为2.5％。优选吐温80体积浓度为0.001%-0.01%，更优选温80体积浓度为0.005%。

    所述血小板生成素拟肽的蛋白浓度为0.1～1mg/mL。

    所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、或柠檬酸缓冲液、或醋酸一醋酸钠缓冲液。所述缓冲液优选为醋酸一醋酸钠缓冲液，浓度为5～50mmol/L。