[发明专利]4个聋病易感基因联合检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.4个聋病易感基因联合检测试剂盒，其特征在于包括DNA聚合酶及其缓冲溶液、扩增各易感基因及Amelogenin基因座的引物、及内标和各基因突变位点对应的基因分型标准物，所述聋病易感基因位点为GJB2235delC，12S rRNA 1555A＞G、1494C＞T，和IVS7-2A＞G。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：

用于GJB2235delC检测的引物为：

SEQ NO.1：5’-CGCATTATGATCCTCGTTGTGG-3’

SEQ NO.2：5’-GCTTGATGAACTTCCTCTTCTTCTC-3’；

用于12S rRNA 1555A＞G突变检测的引物为：

SEQ NO.3：5’-AGTGGGTTTGGGGCTAGGTTTAG-3’

SEQ NO.4：5’-GACGCATTTATATAGAGTAGC-3’；

用于12S rRNA 1494C＞T突变检测的引物为：

SEQ NO.5：5’-AGTGGGTTTGGGGCTAGGTTTA-3’

SEQ NO.6：5’-GCACACCGCCCGTCTCT-3’；

用于IVS7-2A＞G检测的引物为：

SEQ NO.7：5’-CCAGCATTGTAATTTTTTTCCAGG-3’

SEQ NO.8：5’-GTTTAACATCTTTTGTTTTATTTAG-3’；

其中LNA核苷以斜体字表示。

用于Amelogenin基因座检测的引物为：

SEQ NO.9：5’-CCCTGGGCTCTGTAAAGAAT-3’

SEQ NO.10：5’-GCAGAGCTTAAACTGGGAAGC-3’。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述GJB2235delC，12S rRNA1555A＞G、1494C＞T，IVS7-2A＞G及Amelogenin基因座的检测引物，每对引物中有一条引物的5’端进行荧光染料标记。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述GJB2235delC、12S rRNA1555A＞G、1494C＞T，IVS7-2A＞G及Amelogenin基因座的检测引物与内标采用不同的荧光染料标记。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述GJB2235delC，12S rRNA1555A＞G、1494C＞T，IVS7-2A＞G及Amelogenin基因座的复合扩增采用聚合酶链式反应来实现，采用多道或单道毛细管电泳进行检测。

6.权利要求1所述试剂盒应用于聋病易感基因GJB2235delC，12S rRNA 1555A＞G突变、1494C＞T，IVS7-2A＞G及Amelogenin基因座检测的方法，其特征在于通过荧光引物PCR及毛细管电泳特异性检测聋病易感基因及Amelogenin基因座；用于GJB2235delC检测的引物如SEQ NO.1、SEQ NO.2所示；用于12S rRNA 1555A＞G突变检测的引物为：SEQ NO.3和SEQ NO.4所示；用于12S rRNA 1494C＞T突变检测的引物如SEQ NO.5、SEQ NO.6所示；用于SLC26A4基因IVS7-2A＞G位点突变检测的引物为：SEQ NO.7和SEQ NO.8所示；用于Amelogenin基因座检测的引物如SEQ NO.9、SEQNO.10所示；所述各基因座的复合扩增采用聚合酶链式反应来实现，采用多道或单道毛细管电泳进行检测。