[发明专利]一种草鱼基因组DNA快速提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种动物组织DNA提取的方法，更具体的说涉及一种草鱼基因组DNA的提取方法。

背景技术

基因组DNA提取作为一项最基础的分子生物学技术，是开展诸多分子生物学研究的成功保证。对于水产动物育种研究，基础群体遗传多样性研究及早期选育工作，要求尽量保证在不处死并需要大量的研究个体。伴随高通量测序技术及各种基因芯片的发展应用，大规模基因组DNA的提取已成为现在科研工作的必要，而目前许多DNA提取方法已经不能很好的满足这种要求。

常规使用的酚/氯仿的基因组DNA提取方法，不仅操作复杂、耗时长，而且抽提过程中多次使用挥发性试剂，并产生大量的有毒废液，既不安全也不环保。而采用试剂盒进行大规模提取DNA，昂贵的价格不适于大规模作业。本发明提供一种简便快捷并健康安全的草鱼基因组DNA的提取方法。

发明内容DNA

本发明的目的是提供一种草鱼基因组DNA的快速提取方法，以克服现有DNA提取方法存在的缺陷，本发明的提取方法操作简单，快速、安全。

为实现本发明的目的，本发明的技术方案是：

一种草鱼基因组DNA提取方法，包括以下步骤：

1)裂解：草鱼鳍条组织经无菌水清洗后，吸干水分，剪成小碎块，置于无菌离心管中，加入裂解液，颠倒混匀，45-65℃下，裂解1-2.5小时至澄清得草鱼鳍条组织裂解液，裂解过程中将离心管来回颠倒数次；

2)离心：将草鱼鳍条组织裂解液在离心机上离心；

3)吸附：吸取草鱼鳍条组织裂解液离心后的上清液，加入用NaAc溶液滤洗过的吸附柱中，其下面附收集管，静置2-4min后将吸附柱离心，弃去收集管中的废液；

4)漂洗：向吸附柱中加入洗涤液后将吸附柱离心，弃去收集管中的废液；

5)溶解：将漂洗后的吸附柱放置在无菌离心管中，静置1-2min，加入无菌水，静置2-4min后离心，离心管中即为收集的DNA。

在本发明的一优选实施例中，所述步骤1)中裂解液由pH值为8.0，摩尔浓度为1M的Tris·HCl水溶液，pH值为8.0，摩尔浓度为0.5M的EDTANa₂水溶液，质量含量为10％的SDS水溶液，无菌水，蛋白酶K按体积比5∶20∶10∶64∶1混合而成。

在本发明的一优选实施例中，所述步骤1)中裂解液的其用量为：1mg鳍条组织加入20μl裂解液。

在本发明的一优选实施例中，所述步骤3)中NaAc溶液为3M，冰醋酸调节pH值至5.2。

在本发明的一优选实施例中，所述步骤4)中洗涤液由pH值为7.4，摩尔浓度为1M的Tris·HCl水溶液，pH值为8.0，摩尔浓度为0.5M的EDTA水溶液，无水乙醇，无菌水按体积比4∶1∶350∶235混合而成。

在本发明的一优选实施例中，所述步骤4)中洗涤液的体积为步骤3)中加入到吸附柱中上清液体积的1-3倍。

在本发明的一优选实施例中，所述步骤5)中无菌水的体积为步骤3)中加入到吸附柱中上清液体积的0.5-1.2倍。

在本发明的一优选实施例中，所述步骤2)-5)中，离心温度为4-8℃下，离心转速为3000-5000rpm，离心时间为1-5min。

本发明的草鱼基因组DNA提取方法与传统的酚/氯仿的基因组DNA提取方法相比，不仅操作简便、耗时短，减低繁琐操作导致出错的概率，而且抽提过程中避免了使用大量的有毒试剂，更加健康环保；与试剂盒提取基因组DNA的方法相比，本发明的方法成本大大降低。

附图说明

图1是本发明的方法和传统酚/氯仿法提取的草鱼基因组DNA电泳结果，其中1-4为本发明的方法提取获得的DNA样，5-8为传统酚/氯仿法提取获得的DNA样，M为分子量标准D2000。

图2是本发明的方法和传统酚/氯仿法提取的草鱼基因组DNA的PCR扩增产物电泳结果，其中1-4为以本发明提取获得DNA为模板的PCR扩增产物，5-8为以传统酚/氯仿法提取获得DNA为模板的PCR扩增产物，M为分子量标准D2000。

图3本发明的方法和DNA提取试剂盒提取的草鱼基因组DNA电泳结果，其中1-4为本发明的方法提取获得的DNA样，5-8为DNA提取试剂盒提取获得的DNA样，M为分子量标准D2000。

图4是本发明的方法和DNA提取试剂盒提取的草鱼基因组DNA的PCR扩增产物电泳结果，其中1-4为以本发明提取获得DNA为模板的PCR扩增产物，5-8为以DNA提取试剂盒提取获得DNA为模板的PCR扩增产物，M为分子量标准D2000。