[发明专利]一种绞股蓝次生皂苷及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种绞股蓝，尤其是涉及一种绞股蓝次生皂苷及其制备方法与应用。

背景技术

绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum Thnmb Mak.)为葫芦科绞股蓝属植物，绞股蓝主要药效成分为绞股蓝皂甙(gypenoside，GYP)，其具有抑制肿瘤、防止衰老、降低血脂、增强免疫、保护心脏和肝脏、降低血糖、镇静止痛及抗溃疡等药理作用。绞股蓝皂甙因具有与人参皂甙类似主骨架的达玛烷型结构，有“南方人参”和“第二人参”的美誉。

近年来，通过对皂苷生理活性的药效学和代谢动力学研究，人们注意到皂苷中的糖链与其生物活性之间有着密切的联系。许多研究证实，糖链在皂苷的生物活性方面起到重要的作用，皂苷糖分子越少，其活性越高。国内外学者对人参皂苷单体与抗肿瘤活性的构效关系研究表明，低糖链的皂苷及苷元具有较强的抗肿瘤作用，其规律如下：原人参二醇型＞原人参三醇型；苷元＞单糖苷＞二糖苷＞三糖苷＞四糖苷，因此目前国际很多学者都致力于开发制备次生皂苷产品。次生皂苷的制备方法有酸碱水解法和生物转化法，酸碱水解化学方法反应剧烈，副产物多，更多还是倾向于条件要求温和的生物转化法，尤其是微生物转化法。

皂苷微生物转化所用的微生物早期主要是肠道厌氧菌，而其他微生物的研究比较少。肠道厌氧菌发酵最初是以人排泄物中的总菌物进行发酵，后来研究筛选单一肠道菌来转化，如采用肠道乳酸菌转化人参二醇型皂苷制备CK，发现运用Bifidobacterium.minimum KK-1和B.choerinum KK-2共发酵转化Rb1时效果最好，但肠道菌多为厌氧菌，培养条件苛刻，培养基成本高。另有研究筛选原始土壤微生物来降解人参皂苷，但酶解能力低下，目的产物收率不高，须通过优化发酵条件和菌种诱变等方法来提高转化能力。

目前，皂苷微生物转化研究较多的是天然人参皂苷和三七皂苷为前提物的微生物转化制备次生皂苷，如中国专利CN101139562公开利用弗氏链霉菌菌株规模化发酵转化各种三七皂苷、制备Compound K提供一株性状稳定、营养要求简单、生长良好的链霉菌菌株，以及实用简便的全自动发酵罐发酵、分离提取工艺。中国专利CN101928671A公开利用一种链格孢属菌及其发酵人参茎叶总皂苷制备人参皂苷Rg3的方法，中国专利CN1793320A公开一株镰刀霉菌及其用于制备人参皂苷Rh2的方法。根据文献和专利检索，尚未见利用微生物转化法制备具有抗癌活性绞股蓝次生皂苷专利报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种绞股蓝次生皂苷及其制备方法。

本发明的另一目的在于提供绞股蓝次生皂苷在制备抗癌活性剂中的应用。

所述绞股蓝次生皂苷的化合物名称为2α，3β，12β，20(S)-四羟基-24-达玛烯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷，结构式为：

分子式为C₄₂H₇₂O₁₄，分子量为800。

所述绞股蓝次生皂苷为绞股蓝皂苷与微生物共培养后的代谢产物。

所述绞股蓝次生皂苷的制备方法包括以下步骤：

1)制备绞股蓝皂苷：所述制备绞股蓝皂苷的具体方法为将绞股蓝粉末用乙醇溶液在水浴锅中提取，将提取液真空浓缩获得绞股蓝乙醇提取物，再用乙醇溶液溶解后，上样于大孔吸附树脂柱，先用乙醇溶液冲洗后，再用乙醇溶液洗脱绞股蓝皂苷，将洗脱液浓缩干燥，获得绞股蓝皂苷；

2)用微生物转化绞股蓝皂苷：所述用微生物转化绞股蓝皂苷的具体方法为将转化培养基装在250ml三角瓶中，装液量50ml，在121℃，灭菌20min；取活化后的微生物转入马铃薯液体培养基培养，培养至长出真菌孢子，按1％～5％接种量接入转化瓶中，在25～37℃，180～300r/min摇床上培养12～72h后，加入2％～20％绞股蓝皂苷底物进行转化，在25～37℃，180～300r/min摇床上培养继续培养1～5d后，收集转化菌液；

3)制备绞股蓝次生皂苷：微生物转化绞股蓝皂苷后，菌液过滤，取上清液，菌体再用水清洗，上清液上样于大孔吸附树脂，先用乙醇溶液冲洗后，用乙醇溶液洗脱，洗脱液浓缩干燥，获得绞股蓝次生皂苷。