[发明专利]一种绞股蓝次生皂苷及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种绞股蓝次生皂苷，其特征在于其化合物名称为2α，3β，12β，20(S)-四羟基-24-达玛烯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷，结构式为：

分子式为C₄₂H₇₂O₁₄，分子量为800。

2.如权利要求1所述的一种绞股蓝次生皂苷的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)制备绞股蓝皂苷：所述制备绞股蓝皂苷的具体方法为将绞股蓝粉末用乙醇溶液在水浴锅中提取，将提取液真空浓缩获得绞股蓝乙醇提取物，再用乙醇溶液溶解后，上样于大孔吸附树脂柱，先用乙醇溶液冲洗后，再用乙醇溶液洗脱绞股蓝皂苷，将洗脱液浓缩干燥，获得绞股蓝皂苷；

2)用微生物转化绞股蓝皂苷：所述用微生物转化绞股蓝皂苷的具体方法为将转化培养基装在250ml三角瓶中，装液量50ml，在121℃，灭菌20min；取活化后的微生物转入马铃薯液体培养基培养，培养至长出真菌孢子，按1％～5％接种量接入转化瓶中，在25～37℃，180～300r/min摇床上培养12～72h后，加入2％～20％绞股蓝皂苷底物进行转化，在25～37℃，180～300r/min摇床上培养继续培养1～5d后，收集转化菌液；

3)制备绞股蓝次生皂苷：微生物转化绞股蓝皂苷后，菌液过滤，取上清液，菌体再用水清洗，上清液上样于大孔吸附树脂，先用乙醇溶液冲洗后，用乙醇溶液洗脱，洗脱液浓缩干燥，获得绞股蓝次生皂苷。

3.如权利要求2所述的一种绞股蓝次生皂苷的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述将绞股蓝粉末用乙醇溶液在水浴锅中提取时，所述乙醇溶液的用量按质量比为绞股蓝粉末的10～30倍。

4.如权利要求2所述的一种绞股蓝次生皂苷的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述水浴锅的温度为60℃；所述提取提取2～4次，每次提取时间为24～72h。

5.如权利要求2所述的一种绞股蓝次生皂苷的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述再用乙醇溶液溶解是用10％～30％乙醇溶液溶解；所述大孔吸附树脂柱可采用HP20大孔吸附树脂柱。

6.如权利要求2所述的一种绞股蓝次生皂苷的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述先用乙醇溶液冲洗是用10％～30％乙醇溶液冲洗3～5个床体积；所述再用乙醇溶液洗脱绞股蓝皂苷可用40％～80％乙醇溶液洗脱绞股蓝皂苷。

7.如权利要求2所述的一种绞股蓝次生皂苷的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述微生物采用曲霉属真菌，所述曲霉属真菌可选自黑曲霉、构巢曲霉、青霉、灰绿曲霉中的一种。

8.如权利要求2所述的一种绞股蓝次生皂苷的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述转化培养基的组成为：葡萄糖5～50g/L，蛋白胨1～5g/L，酵母膏1～5g/L，磷酸氢二钾2～10g/L，氯化钙2～8g/L，吐温80(2～5)ml，七水硫酸镁1～5g/L，四水硫酸锰1～5g/L。

9.如权利要求2所述的一种绞股蓝次生皂苷的制备方法，其特征在于在步骤3)中，所述过滤是采用8层纱布过滤；所述清洗是清洗至少2次；所述大孔吸附树脂可采用预处理好的HP20大孔吸附树脂；所述先用乙醇溶液冲洗可用30％～50％乙醇溶液冲洗3～5个床体积；所述用乙醇溶液洗脱可用60％～100％乙醇溶液洗脱。

10.如权利要求1所述的一种绞股蓝次生皂苷在制备抗癌活性剂中的应用。