[发明专利]一种合成利西拉来的方法

说明书

技术领域

本发明涉及固相合成多肽领域，特别涉及一种合成利西拉来的方法。

背景技术

利西拉来是一种含44个氨基酸残基的线性多肽，它的分子式是：C₂₁₅H₃₄₇N₆₁O₆₅S，分子量：4858.55，CAS号为：320367-13-3。利西拉来的结构是基于exendin-4分子碳末端进行修饰，依次连接六个赖氨酸残基，氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

利西拉来是一种用于治疗2型糖尿病治疗的多肽药物，目前在进行临床III期研究阶段，是由安托万-赛诺菲与Zealand制药研发的胰高血糖素样肽1(GLP-1)受体激动剂，利西拉来(lixisenatide)联合基础胰岛素治疗2型糖尿病患者，显著改善了血糖控制，降低糖化血红蛋白(HbAlc)水平，也无与利西拉来有关的特异性安全事件报道。

目前国外多采用基因重组制备利西拉来，但是特定的菌种不易得到，人力物力消耗较大，纯化困难，产品纯度较低，不适用于工业化大生产。因此，提供一种操作简便、环保、纯化方便、纯度较高的利西拉来合成方法，具有重要有意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种合成利西拉来的方法。该方法采用氨基树脂作为固相载体，首先在该树脂上偶联Fmoc-Lys(Boc)-OH之后，采用Fmoc保护策略的固相接肽法进行后续氨基酸的逐步偶联，得到全保护的肽树脂，用裂解液进行切割，乙醚沉降、离心干燥后得到利西拉来粗品，再经过反相高效液相色谱法纯化、转盐，得到利西拉来。该方法操作简单，产品纯度高、收率好，达到产业化要求。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种合成利西拉来的方法，包括如下步骤：

步骤1：取Fmoc保护的氨基树脂与脱保护剂混合，脱保护后，获得氨基树脂；

步骤2：取侧链保护基团为Boc的Fmoc-Lys-OH与氨基树脂通过偶联剂进行缩合，获得侧链保护基团为Boc的Fmoc-Lys-氨基树脂；

步骤3：按照Fmoc固相合成法重复步骤1中脱保护与步骤2中氨基酸与树脂偶联的操作，将具有侧链保护基团的氨基酸从肽链碳端到氮端依次偶联，获得肽树脂；所述氨基酸的α-氨基的保护基团为Fmoc；

步骤4：取所述肽树脂经裂解液裂解，脱除保护基团，经乙醚沉降、离心、干燥后获得利西拉来粗品，再经纯化、转盐后，即得；

所述具有保护基团的氨基酸中，赖氨酸的侧链保护基团为Boc，丝氨酸的侧链保护基团为tBu，天冬酰胺的侧链保护基团为Trt，色氨酸的侧链保护基团为Boc，谷氨酸的侧链保护基团为OtBu，精氨酸的侧链保护基团为Pbf，谷氨酰胺的侧链保护基团为Trt，天冬氨酸的侧链保护基团为OtBu，苏氨酸的侧链保护基团为tBu，组氨酸的侧链保护基团为Trt。