[发明专利]一种从绵羊毛囊组织中提取总RNA的方法

权利要求书

1.一种从绵羊毛囊组织中提取总RNA的方法，其特征在于以下步骤：

(1)现场采集：

a)取绵羊毛囊至装有700μL TRIzol的1.5mL锥形底离心管中，毛囊组织的收集量至毛囊组织总体积占TRIzol液体体积的1/3；

b)立刻用小型塑料研磨杵在离心管内研磨1min，向离心管内补充300μL TRIzol使1.5mL离心管内的TRIzol总量达1mL；盖好盖子甩动离心管让毛囊完全浸泡在TRIzol液体中，将离心管放入离心管盒内，即完成采集；

c)在避光条件下，于24小时内将研磨后装有样品的离心管放入-20℃暂时冻存；

(2)样品运输：

将装有样品的离心管从-20℃取出放入泡沫盒，同时放入足够量的冰袋，密封后进行运输，使保证运输时冰袋中的冰不完全融化为准；

(3)样品保存：

在室温下解冻浸泡在TRIzol液体中的样品，于4℃12000rpm离心10min，吸取TRIzol液体至新离心管，将TRIzol液体放入-80℃保存，保存期至少为1个月至毛囊RNA不被降解；

(4)RNA提取：

a)在室温下解冻由步骤(3)中冻存的TRIzol样品液体，向每1mLTRIzol样品中加入200μL氯仿，剧烈震荡混匀20s，于室温下静置5min；

b)于4℃12000rpm离心15min，得上清，取400μL所得的上清至新的离心管；

c)向所得的上清中加入400μL异丙醇，上下颠倒混匀10次，于室温下静置10min；

d)于4℃12000rpm离心10min，可见管底有白色沉淀，弃液体，保留管底的白色沉淀；

e)向离心管中加入1mL 75％浓度的乙醇溶液，用手指弹动离心管底，让沉淀悬浮于液体之中；

f)于4℃7500rpm离心5min，弃液体，用枪头吸干管底残液，不要触及沉淀，避免将沉淀吸走；

g)于室温下晾干沉淀后，用RNase-Free ddH₂0溶解沉淀，得到绵羊毛囊组织总RNA样品。