[发明专利]用于解离Fcgamma-受体-IgG复合物及纯化与检测IgG的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种用于从含有IgG的样品中分离Fab片段的方法，所述方法包括：

(a)使所述含有IgG的样品与IdeS和Fc结合蛋白接触；

(b)从所述接触过的样品中分离所述IdeS和所述Fc结合蛋白；以及

由此分离Fab片段；其中所述Fc结合蛋白是缺乏IgG内切糖苷酶活性的EndoS多肽。

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(a)还包括使所述样品与能够结合IdeS多肽和Fc结合蛋白的磁性纳米颗粒群接触，且步骤(b)包括对所述接触过的样品进行磁场分离，和/或其中所述EndoS多肽包括：

(a)SEQ ID NO：2的氨基酸序列；

(b)(a)的变体，该变体与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少50％同一性并具有IgG结合活性；或

(c)上述任一者的具有IgG结合活性的片段。

3.一种用于从含有IgG的样品中分离Fc片段的方法，所述方法包括：

(a)使所述含有IgG的样品与IdeS接触；

(b)从步骤(a)获得的混合物中分离IdeS，由此分离Fab和Fc片段；

(c)使所述Fab和Fc片段与Fc结合蛋白接触，由此能够形成Fc片段-Fc结合蛋白复合物；

(d)从步骤(c)获得的混合物分离所述Fc片段-Fc结合蛋白复合物；以及

(e)从步骤(d)获得的所述Fc片段-Fc结合蛋白复合物分离Fc片段；

其中所述Fc结合蛋白是缺乏IgG内切糖苷酶活性的EndoS多肽。

4.根据权利要求3所述的方法，其中步骤(a)还包括使所述样品与能够结合IdeS的磁性纳米颗粒群接触，步骤(c)还包括使步骤(b)获得的所述分离的Fab和Fc片段与能够结合Fc结合蛋白的磁性纳米颗粒群接触，且步骤(b)和(d)包括对所述接触过的样品或分离的Fab和Fc片段分别进行磁场分离，和/或其中所述EndoS多肽包括：

(a)SEQ ID NO：2的氨基酸序列；

(b)(a)的变体，该变体与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少50％同一性并具有IgG结合活性；或

(c)上述任一者的具有IgG结合活性的片段。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，所述方法在步骤(a)之前包括：

(i)使得所述含有IgG的样品与所述EndoS多肽接触，由此能够形成IgG-EndoS多肽复合物；

(ii)从所述接触过的样品中分离所述IgG-EndoS多肽复合物；

(iii)从IgG-EndoS多肽复合物洗脱IgG，由此获得含有IgG的样品；以及

其中，对在步骤(iii)获得的含有IgG的样品进行步骤(a)和(b)。

6.一种用于从含有IgG的样品中分离IgG的方法，所述方法包括：

(a)使所述含有IgG的样品与缺乏IgG内切糖苷酶活性的EndoS多肽接触，由此能够形成IgG-EndoS多肽复合物；

(b)从所述接触过的样品中分离所述EndoS；以及

由此获得分离的IgG。

7.一种用于测定样品中是否存在IgG的方法，所述方法包括：

(a)使所述样品与缺乏IgG内切糖苷酶活性的EndoS多肽接触，由此能够形成IgG-EndoS多肽复合物；

(b)任选地，从所述接触过的样品中分离所述EndoS；以及

(c)测定所述分离的EndoS是否与IgG结合，以及

由此测定所述样品中是否存在IgG。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其中所述EndoS多肽包括：

(a)SEQ ID NO：2的氨基酸序列；

(b)(a)的变体，该变体与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少50％同一性并具有IgG结合活性；或

(c)上述任一者的具有IgG结合活性的片段。

9.根据权利要求6至8中任一项所述的方法，其中所述分离或检测到的IgG为天然的功能活性形式。