[发明专利]高甘露糖蛋白质和产生高甘露糖蛋白质的方法

权利要求书

1.一种生产高甘露糖葡糖脑苷脂酶(hmGCB)的方法，包括：

提供一种能表达葡糖脑苷脂酶(GCB)的细胞；和

在防止去除远离GCB前体寡糖的五糖核心的至少一个甘露糖残基的条件下生产含有前体寡糖的GCB，从而生产一种hmGCB制剂。

2.权利要求1的方法，其中防止去除远离五糖核心的一个或多个α1，2甘露糖残基。

3.权利要求1的方法，其中防止去除远离五糖核心的一个或多个α1，3甘露糖残基。

4.权利要求1的方法，其中防止去除远离五糖核心的一个或多个α1，6甘露糖残基。

5.权利要求1的方法，其中该方法包括使细胞接触一种物质，该物质可防止去除远离GCB前体寡糖五糖核心的至少一个甘露糖残基。

6.权利要求5的方法，其中该物质是一种甘露糖苷酶抑制剂。

7.权利要求6的方法，其中该甘露糖苷酶抑制剂是一种1类加工甘露糖苷酶抑制剂。

8.权利要求6的方法，其中该甘露糖苷酶抑制剂是一种2类加工甘露糖苷酶抑制剂。

9.权利要求7的方法，其中1类加工甘露糖苷酶抑制剂选自：kifunensine、deoxymannojirimycin和其组合。

10.权利要求7的方法，其中1类加工甘露糖苷酶抑制剂是kifunensine。

11.权利要求8的方法，其中2类加工甘露糖苷酶抑制剂选自：苦马豆素、mannostatin、6-脱氧-DIM、6-脱氧-6-氟-DIM和其组合。

12.权利要求8的方法，其中2类加工甘露糖苷酶抑制剂是苦马豆素。

13.权利要求6的方法，其中甘露糖苷酶抑制剂以约0.05-20.0μg/ml的浓度存在。

14.权利要求13的方法，其中甘露糖苷酶抑制剂以约0.1-2.0μg/ml的浓度存在。

15.权利要求7的方法，其还包括使细胞接触一种2类加工甘露糖苷酶抑制剂。

16.权利要求15的方法，其中2类加工甘露糖苷酶抑制剂选自：苦马豆素、mannostatin和其组合。

17.权利要求15的方法，其中2类加工甘露糖苷酶抑制剂是苦马豆素。

18.权利要求1的方法，其中细胞是至少一种甘露糖苷酶的敲除体。

19.权利要求18的方法，其中细胞是1类加工甘露糖苷酶的敲除体。

20.权利要求18的方法，其中细胞是2类加工甘露糖苷酶的敲除体。

21.权利要求18的方法，其中细胞是1类加工甘露糖苷酶和2类加工甘露糖苷酶的敲除体。

22.权利要求1的方法，其中细胞含有一种反义甘露糖苷酶分子。

23.权利要求22的方法，其中所述反义分子选自：1类加工甘露糖苷酶反义分子、2类加工甘露糖苷酶反义分子、1类加工甘露糖苷酶反义分子和2类加工甘露糖苷酶反义分子两者。

24.权利要求1的方法，其中hmGCB具有一条至少含4个甘露糖残基的糖链。

25.权利要求24的方法，其中hmGCB具有一条至少含5个甘露糖残基的糖链。

26.权利要求24的方法，其中hmGCB具有一条至少含8个甘露糖残基的糖链。

27.权利要求24的方法，其中hmGCB具有一条至少含9个甘露糖残基的糖链。

28.权利要求1的方法，其中产生的hmGCB的甘露糖残基与GlcNAc残基之比大于3个甘露糖残基比2个GlcNAc残基。

29.权利要求1的方法，其中在hmGCB的至少2条糖链上防止去除一个或多个远离五糖核心的甘露糖残基。

30.权利要求1的方法，其中制品中至少60％的hmGCB含有一条或多条糖链，其中防止去除一个或多个远离五糖核心的甘露糖残基。