[发明专利]一种分离培养内皮克隆形成细胞的方法

权利要求书

1.一种从脐带中分离培养内皮克隆形成细胞的方法，其包括以下步骤：

(1)用消化酶消化离体脐带的脐静脉血管内膜；

(2)冲洗消化后的脐静脉，收集冲洗液；

(3)取冲洗液进行细胞培养，得到内皮克隆形成细胞。

2.权利要求1的方法，其中所述消化酶为胶原酶、透明质酸酶或脱氧核糖核酸酶I型。

3.权利要求1的方法，其中所述用消化酶消化脐静脉血管内膜前还包括冲洗脐带外周及脐静脉腔内残留血液的步骤。

4.权利要求1的方法，其中所述用消化酶消化脐静脉血管内膜的方法为将消化酶注入脐静脉腔内；任选地，在将消化酶注入脐静脉腔内之前还包括结扎脐静脉一端的步骤。

5.权利要求1的方法，其中所述取冲洗液进行细胞培养之前还包括将冲洗液进行浓缩的步骤；所述浓缩的方法例如为先离心，然后弃上清。

6.权利要求2的方法，其中所述胶原酶的浓度为0.05-0.2％重量体积比，例如所述浓度为0.1％重量体积比。

7.权利要求1的方法，其中所述的用消化酶消化的时间为30-120min，例如为60min。

8.权利要求1的方法，其中所述细胞培养的培养基为M199培养基或EGM-2培养基。

9.根据权利要求1-8任一项所述方法获得的内皮克隆形成细胞。

10.权利要求9的内皮克隆形成细胞，其表达CD34、CD73、CD90、CD105、CD31和VEGFR2，不表达CD45和HLA-DR。

11.权利要求9的内皮克隆形成细胞，其表达vWF。

12.脐带在制备内皮克隆形成细胞中的用途。

13.血管内膜消化酶在制备内皮克隆形成细胞中的用途。