[发明专利]一种老刺木碱的制备方法

说明书

技术领域：

本发明属于天然植物提取领域，具体涉及一种老刺木碱的制备方法。

背景技术：

夹竹桃科(Apocynaceae)狗牙花属(Ervatamia Stapf)植物在全世界共有约120种，主要分布于印度、中国西南部、越南、缅甸、泰国、马来西亚、印度尼西亚、菲律宾和澳大利亚等地，南美洲也有分布。我国产15种、5变种，分布于西南、华南及台湾省。在各地本属植物均属于民间药物，用于治疗腹痛、喉痛及高血压等疾病。我国科学家对国产狗牙花属植物的化学成分和药理活性也进行了较多的研究，并发现了一些新化合物及药理活性成分。

海南狗牙花Ervatamia hainanensis Tsiang的根也称单根木、独根木、山辣椒树、艾角青、鸡爪花等，有清热解毒、降压、消肿止痛之功效，用于高血压病、咽喉肿痛、风湿痹痛等疾病的治疗。

老刺木碱(Vobasine)：分子式C₂₁H₂₄N₂O₃，分子量352.43，mp.109～110℃(丙酮)，Rf0.33(环己烷-氯仿-二乙胺，6∶3∶1)；0.58(乙醚-乙醇-二乙胺，18∶1∶1)；0.67(氯仿-丙酮-二乙胺，5∶4∶1)。老刺木碱在夹竹桃科狗牙花属植物中分布较广，现代药理研究表明老刺木碱具有多重药理作用，如(1)兴奋中枢神经作用，成瘾性试验中，其SDD 125(Standard delying dose 125)为0.00351μM/kg；(2)肌松作用，20mg/kg时，有较弱的肌松活性；(3)降压作用，在大鼠中有two-stage降压作用。

目前提取老刺木碱的方法主要为采用溶剂萃取、常压反复硅胶柱层析或氧化铝柱层析进行分离，存在产量小、得率低、生产周期长等问题，不适用于工业生产。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种老刺木碱的制备方法，该方法操作简单、得率高、安全环保，可快速大量分离高纯度老刺木碱。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

(1)提取：取海南狗牙花粉碎成粗粉，加乙醇热回流提取2-4小时，滤出，提取液减压回收得浸膏；

(2)氧化铝柱层析分离：将上述浸膏加水分散，与氧化铝树脂拌匀、干燥后装柱，用氯仿-丙酮混合溶液洗脱，薄层检测，收集老刺木碱流分，浓缩；

(3)制备液相分离：取一定量的浓缩液，用甲醇溶解上反相C18色谱柱，用氯仿-甲醇作为流动相，梯度洗脱，薄层监测，收集老刺木碱组分，将洗脱液旋转蒸发浓缩，得老刺木碱粗晶；

(4)重结晶：将老刺木碱粗晶用氯仿-丙酮重结晶，冷冻干燥得到高纯度老刺木碱晶体。

步骤(2)所述氧化铝树脂为80-120目，洗脱溶剂为氯仿-丙酮(1∶1)，用量为柱体积的4-10倍。

步骤(3)所述流动相氯仿-甲醇梯度洗脱条件为：氯仿-甲醇(4∶1，3∶2，2∶3，1∶4)，色谱柱填料为C18，流速为8-20ml/min，柱温为室温。

步骤(4)所述氯仿-丙酮的体积比为1-3∶1。

本发明的优点在于：1)操作简单、耗时短，易于产业化放大；2)提取、柱层析、制备液相分离等步骤中的溶剂用量少，并可回收再利用；3)具有较高的经济效益和学术价值，本发明所得产品纯度高，可为老刺木碱的进一步开发提供药理原料和实践支持。

具体实施方式：

下面结合具体实施例对本发明进一步说明：

实施例1：

取海南狗牙花1kg，粉碎成粗粉，加乙醇热回流提取4小时，滤出，提取液减压回收得浸膏，向浸膏加水分散，与氧化铝树脂(120目)拌匀、干燥后装柱，用10倍柱体积的氯仿-丙酮(1∶1)混合溶液洗脱，薄层检测，收集老刺木碱流分，浓缩得浓缩液。将浓缩液加入甲醇至刚好溶解，溶解后的溶液用0.45μm膜滤，取滤液进样，以氯仿-甲醇为流动相，按(4∶1，3∶2，2∶3，1∶4)进行梯度洗脱，色谱柱填料为C18，流速为20ml/min，柱温为室温，进行老刺木碱的制备分离，紫外检测器在线监测，针对性收集老刺木碱的流分溶液，减压回收试剂得老刺木碱粗晶，用氯仿-丙酮(1∶1)重结晶，冷冻干燥得到高纯度老刺木碱晶体1.2mg。

实施例2：