[发明专利]一种快速提取质粒DNA的试剂盒及其提取方法

权利要求书

1.一种快速提取质粒DNA的试剂盒，其特征在于，试剂盒由溶液I-VI组成：

溶液I：50mM Tris-HCI和10mM EDTA，pH＝8.0(25℃)，50微克/毫升RNaseA；

溶液II：0.2M NaOH和1％SDS；

溶液III：4M盐酸胍和0.5M醋酸钾，pH＝4.2；

溶液IV：5M盐酸胍，20mM Tris-HCI，pH6.6(25℃)，使用前加入乙醇，乙醇浓度为38％；

溶液V：20mM NaCL，2mM Tris-HCI，pH 7.5(25℃)，使用前加入乙醇，乙醇浓度为80％；

溶液VI：10mM Tris-HCI，pH 8.5(25℃)。

2.应用权利要求1所述试剂盒的质粒DNA提取方法，其特征在于：包括以下步骤：A1、用1.5ml离心管收集1-5ml菌液。12,000rpm离心1min，弃上清；

A2、加入250μl溶液I，漩涡剧烈振荡直至菌体完全重新悬浮；室温静置1-2min；

A3、加入250μl溶液II，轻柔地反复颠倒混匀5-6次；室温静置1-2min，使菌体充分裂解，直至形成澄清的裂解溶液；

A4、加入350μl溶液III，立即轻柔地反复颠倒混匀5-6次；

A5、12,000rpm室温离心10min，收集上清；

A6、将上清置于DNA纯化柱中，静置1-2min；

A7、12,000rpm离心1min，弃滤液；

A8、加入500μl溶液IV，12,000rpm离心1min，弃滤液；

A9、加入500μl溶液V，12,000rpm离心1min，弃滤液；

A10、加入500μl溶液V，12,000rpm离心1min，弃滤液；

A11、12,000rpm离心3min，以彻底去除纯化柱中残留的液体；

A12、将DNA纯化柱置于新的离心管中，向纯化柱中央处悬空滴加50-100μl溶液VI，室温放置2min；12,000rpm离心1min，管底即为高纯度质粒DNA。