[发明专利]一种新型连接酶反应介导的扩增方法及用途

权利要求书

1.一种连接酶反应介导的扩增方法，采用连接探针a、b、c介导扩增，其特征在于：每条连接探针由特异杂交序列及填入的标签序列组成，具体为：目标序列7从3’端到5’端分别分为A段，B段，C段和D段，连接探针a为A段的反向互补序列2加上一段上游引物标签序列1组成，即2－1； 连接探针b为C段的反向互补序列3’，加上B段和C段之间的检测标签序列4和B段的反向互补序列3组成，即3’-4-3； 连接探针c为一段下游引物结合标签序列6加上D段的反向互补序列5组成，即6－5；所述的序列1、4、6为不与目标序列杂交的序列。

2.权利要求1的连接酶反应介导的扩增方法，其特征在于：所述的上游引物标签序列1、下游引物结合标签序列6和检测标签序列4的设计原则分别为：GC含量适中，Tm值为55-70℃，长度为18-35nt，与目标基因组无较高同源性。

3.权利要求1的连接酶反应介导的扩增方法，其特征在于：所述的序列2、3、3’、5为 GC含量适中，Tm值为50-70℃，与目标序列特异杂交。

4.权利要求1的连接酶反应介导的扩增方法，其特征在于：所述的连接探针a、b和c的序列中除去序列1、4、6外均为特异杂交序列。

5.一个试剂盒，包含权利要求1－4中任一项所述的连接探针a、b和c。

6.一种芯片，包含权利要求1－4中任一项所述的连接探针a、b和c。

7.权利要求1的连接酶反应介导的扩增方法及权利要求5的试剂盒和权利要求6的芯片的用途。

8.权利要求7的用途是指在进行基因序列分型、定量等检测中的用途。

9.一种连接酶反应介导的扩增方法所用连接探针a、b和c的制备方法，其步骤为，选定模板的目标序列7，将其从3’端到5’端分别分为相互不间隔的A、B、C、D段，A的反向互补序列为序列2，B的反向互补序列为序列3，C的反向互补序列为序列3’，D的反向互补序列为序列5，其中连接探针a即为序列2加上序列1，连接探针b为序列3加上序列4加上序列3’，连接探针c为序列6加上序列5，其中序列1、4、6为GC含量适中，Tm值为55-70℃，长度为18-35bp，与目标基因组无较高同源性的序列；其中的序列2、3、3’、5的GC含量适中，Tm值为50-70℃，按照连接探针a、b、c的序列，化学合成即可。