[发明专利]一种蚯蚓提取物及其提取方法和应用

权利要求书

1.一种蚯蚓提取物，其特征在于：由以下方法提取获得：

(1)粗多肽的制备：、将冰冻蚯蚓1kg，切成小段，用预先冷却的蒸馏水冲洗，至完全无血色为止；绞成肉泥，加入预冷的匀浆液，用胶体磨反复匀浆；所得匀浆液离心，取上清，加入95％乙醇使其终浓度达到60％，4℃放置并搅拌，4h后离心，取上清；所得上清真空旋转蒸发回收乙醇至浓缩液体积为500ml；浓缩液冷冻干燥，得到蚯蚓多肽粗提物，-20℃保存为冻干品待用；

(2)粗多肽的脱盐纯化：取步骤(1)所得的冻干品2.5g，用10ml蒸馏水溶解，以Sephadex G-25为介质装填层析柱、，层析柱用蒸馏水充分平衡，将样品加入柱内，用蒸馏水洗脱，流速为2.5ml/min，至出峰时起用自动馏分收集器收集，每管10ml；测定各管的电导率，将峰前部分收集，冻干得冻干品即为蚯蚓多肽。

2.根据权利要求1所述的蚯蚓提取物，其特征在于：步骤(1)所述的蚯蚓为赤子爱胜蚯蚓，Eisenia foetida。

3.根据权利要求1所述的蚯蚓提取物，其特征在于：步骤(1)中预先冷却的蒸馏水的温度为3-5℃。

4.根据权利要求1所述的蚯蚓提取物，其特征在于：步骤(1)中匀浆液为pH＝4的甘氨酸水溶液5000ml。

5.根据权利要求1所述的蚯蚓提取物，其特征在于：步骤(1)中离心的条件为：温度4℃，转速5500rpm，时间15min。

6.根据权利要求1所述的蚯蚓提取物，其特征在于：步骤(1)中蒸发的温度为55℃。

7.根据权利要求1所述的蚯蚓提取物，其特征在于：步骤(1)中操作除回收乙醇外均应在低温4℃条件下进行。

8.根据权利要求1所述的蚯蚓提取物，其特征在于：步骤(1)中步骤(2)得到的冻干品在-20℃保存。

9.一种蚯蚓提取物的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)粗多肽的制备：新鲜冰冻蚯蚓1kg，切成小段，用预先冷却的蒸馏水(3-5℃)冲洗，至完全无血色为止；绞肉机绞成肉泥，加入预冷的匀浆液，pH为4的甘氨酸水溶液5000ml，用胶体磨反复匀浆；所得匀浆液离心(4℃，5500rpm，10min)，取上清，加入95％乙醇使其终浓度达到60％，4℃放置并搅拌，4h后离心(4℃，5500rpm，15min)，取上清；所得上清真空旋转蒸发回收乙醇至浓缩液体积为500ml；浓缩液冷冻干燥，得到蚯蚓多肽粗提物，-20℃保存为冻干品待用；以上操作除回收乙醇外均应在低温4℃条件下进行；

(2)粗多肽的脱盐纯化：取上述冻干品2.5g，用10ml蒸馏水溶解，以Sephadex G-25为介质装填层析柱(柱规格：ф35mm×30cm)，层析柱用蒸馏水充分平衡，将样品加入柱内，用蒸馏水洗脱，流速为2.5ml/min，至出峰时起用自动馏分收集器收集，每管10ml；采用电导率仪测定各管的电导率，将峰前部分收集，冻干得冻干品即为蚯蚓多肽。

10.一种蚯蚓提取物蚯蚓多肽在构建对帕金森病离体细胞模型保护方面的应用。