[发明专利]一种产乙偶姻菌株的筛选方法及用该菌株发酵法生产乙偶姻

权利要求书

1.一种产乙偶姻菌株的筛选方法，其特征为：

从无锡郊外菜地地表取土样，称取约5.0g，在80℃的烘箱中烘烤48h，加入到200ml的无菌水中制成悬液。此菌悬液作为母液梯度稀释至10^-6，取10^-4-10^-6稀释菌液涂布于富集培养基上，37℃倒置培养24h，挑取不同菌落形态的单菌落进行V-P实验考察，将V-P阳性菌株逐一转接发酵培养基，并进行编号保存；培养结束后各取2ml，10000r/min离心10min，用HPLC法检测上清液中的乙偶姻含量，筛选出十几株产乙偶姻的菌株，其中菌株FMME044产乙偶姻的能力最强。

2.根据权利要求1所述一种产乙偶姻菌株的筛选方法，其筛选得到产乙偶姻菌株经生理生化及16S rDNA分子生物学鉴定为解淀粉芽孢杆菌，并命名为Bacillus amyloliquifaciensFMME044。

3.一种乙偶姻的生产方法，其特征是采用Bacillus amyloliquifaciens FMME044为出发菌株，以种子培养和液体发酵生产乙偶姻；

1)种子培养：

种子培养基以g/L计：葡萄糖10，牛肉膏5，蛋白胨5，初始PH 7.0；

培养条件：温度37℃、摇床转速200rpm条件下，培养10-12h；

2)液体发酵培养：

发酵培养基以g/L计：葡萄糖120，蛋白胨10，酵母粉10，NaCl 5，K₂HPO₄ 3，MgSO₄ 0.4，初始pH 7.0；

发酵条件：接种量10％(v/v)，温度37℃、摇床转速200rpm条件下，发酵60-72h；

3)7L发酵罐发酵培养：

发酵培养基以g/L计：葡萄糖120，蛋白胨10，酵母粉10，NaCl 5，K₂HPO₄ 3，MgSO₄ 0.4，初始pH 7.0；

7L发酵罐中发酵培养基装液量为4L，接种量10％(v/v)，温度为37℃，搅拌转速为400r/min，通气量为1.0vvm，过程中不控制pH，培养时间32-48h。