[发明专利]检测杀虫晶体蛋白Bt Cry1Ab/Ac的方法及其专用酶联免疫试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测杀虫晶体蛋白Bt Cry1Ab/Ac的方法及其专用酶联免疫试剂盒。

背景技术

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis，简称Bt)杀虫晶体蛋白基因抗虫基因在棉花和玉米等作物上得到了很成功的应用。根据编码基因序列的同源性和编码蛋白的杀虫谱，Bt杀虫晶体蛋白划分为cry族和cryt族，每一类下又分为数量不等的亚类。目前在植物中表达的Bt基因有Bt cry1Aa，cry1Ab，cry1Ac，cry2Aa，cry3Bb，cry9c。Bt Cry1Ab/Ac蛋白具有非常高的相似度，目前市场上商业化的作物中的转BtCry1Ac蛋白基因已包含Bt Cry1Ab蛋白基因。

Bt免疫检测试剂盒已广泛应用于转基因抗虫棉花、玉米种子质量检测、真伪鉴定，食品中转基因成分分析及生物安全性的研究。Bt Cry1Ab/Ac试剂盒的好坏完全取决于所制备抗体的好坏。国内外文献报道中的Cry1A抗体，均通过苏云金芽孢杆菌发酵、提取、纯化得到的蛋白作为抗原免疫动物制备的。由于Bt Cry1Ab/Ac蛋白在植物和动物中的翻译后修饰不同，往往导致利用菌株表达的蛋白对植物中的Bt Cry1Ab/Ac识别率和亲和力较低。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测杀虫晶体蛋白Bt Cry1Ab/Ac的方法及其专用酶联免疫试剂盒，该方法及其专用试剂盒所使用的抗Bt Cry1Ab/Ac的单克隆抗体是由杂交瘤细胞株Bt2F9分泌产生的，该杂交瘤细胞株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.5162。

上述杂交瘤细胞株Bt2F9CGMCC No.5162分泌产生的抗Bt Cry1Ab/Ac蛋白的单克隆抗体，也是本发明保护的范围。

上述抗Bt Cry1Ab/Ac蛋白的单克隆抗体可用于检测或辅助检测Bt Cry1Ab/Ac蛋白，尤其适合于检测或辅助检测转基因植物中的Bt Cry1Ab/Ac蛋白。

本发明所提供的杂交瘤细胞株Bt2F9或抗Bt Cry1Ab/Ac蛋白的单克隆抗体可用于制备检测或辅助检测Bt Cry1Ab/Ac蛋白的试剂或试剂盒，特别是用于制备检测或辅助检测转基因植物中Bt Cry1Ab/Ac蛋白的试剂或试剂盒。

本发明所提供的酶联免疫试剂盒可用于检测或辅助检测Bt Cry1Ab/Ac蛋白，所述试剂盒中含有独立包装的所述单克隆抗体。

在本发明所提供的试剂盒中，还可含有独立包装的抗Bt Cry1Ab/Ac蛋白的多克隆抗体和/或独立包装的Bt Cry1Ab/Ac蛋白标准品和/或独立包装的用于标记所述单克隆抗体的标记酶；

所述抗Bt Cry1Ab/Ac蛋白的多克隆抗体是以Bt Cry1Ab/Ac蛋白为免疫原免疫脊椎动物得到的；所述Bt Cry1Ab/Ac蛋白标准品可为Bt Cry1Ab/Ac蛋白或由所述BtCry1Ab/Ac蛋白配制成的一系列不同浓度的Bt Cry1Ab/Ac蛋白溶液；所述一系列不同浓度的Bt Cry1Ab/Ac蛋白溶液的浓度具体可为：50ng/mL、25ng/mL、12.5ng/mL、6.25ng/mL、3.1ng/mL、1.56ng/mL和0.78ng/mL，所述Bt Cry1Ab/Ac蛋白溶液的溶剂具体可为PBS缓冲液；所述PBS缓冲液的溶剂为水，溶质为Na₂HPO₄、KH₂PO₄和NaCl，pH值为7.5；溶质Na₂HPO₄、KH₂PO₄和NaCl在所述PBS缓冲液中的浓度分别为0.02M、0.0015M和0.14M。

在本发明所提供的试剂盒中，还可含有独立包装的包被缓冲液和/或独立包装的洗涤液和/或独立包装的底物缓冲液和/或独立包装的终止缓冲液和/或独立包装的封闭液；

所述包被缓冲液的溶剂为水，溶质为Na₂CO₃和NaHCO₃；溶质Na₂CO₃和NaHCO₃在所述包被缓冲液中的浓度分别为0.01M和0.04M；所述包被缓冲液的pH值为9.6；