[发明专利]适于SLμCUT系统的小麦异代换系染色体标本制备及微切割方法

说明书

技术领域

适于SL μCUT系统的小麦异代换系染色体标本制备方法与微切割，属于分子细胞遗传学领域。 

背景技术

染色体微切割、微分离与微克隆(chromosome micro-dissection and micro-cloning)技术是由Scalenghe等(Scalenghe F.，E.Turco，J.E.Edstrom，et al.Microdissection and cloning of DNA from a specific region of Drosophila melanogaster polytene chromosome[J].Chromosoma，1981，82：205-216)创立的一项分子细胞遗传学新技术。该技术首先对果蝇染色体进行了切割，成功获得了80个克隆，随后用于鼠和人类(Rohme Dan，Howard Fox，Bernhard Herrmann，et al.Molecular clones of the mouse complex derived from microdissected metaphase chromosomes[J].Cell，1984，36：783-788.)。随着PCR技术的发展，微切割和微克隆技术得到了较大发展(Ludecke HJ，Gabriele Senger，Use Claussen，et al.Cloning defined regions of human genome by microdissection of banded chromosomes and enzymatic amplification[J].Nature，1989，338：348-350)。自Sandery等(Sandery M J，et al.Isolation of sequence common to A and B chromosomes of rye  (Secale cereal L.)by micro cloning[J].Plant Molecular Biology Reporter，1991，9(1)：21-30)利用染色体微切割和微克隆技术获得了黑麦DNA克隆以来，该技术在植物染色体文库的构建、特异探针筛选、抗性基因的克隆以及遗传与进化研究上得到了较为广泛应用，但是，相比较而言，植物在这方面开展的研究仍然滞后于动物和人类。目前，植物染色体显微切割技术主要存在以下几个方面的困难： 

(1)植物细胞壁的存在、同步化的困难，阻碍了良好分散染色体标本的制备。背景不干净，影响了切割效率。可以说，染色体标本的制备是影响染色体切割最基础的技术之一。 

(2)植物基因组倍性多样，染色体结构变异大，基因排列顺序不够保守；植物染色体DNA含量高、蛋白质含量低，绝大多数染色体不能象脊椎动物染色体显示G、R或Q带 带纹而不影响DNA序列(Fukui k.，M.Minezawa，Y.Kamisugi，et al.Microdissection of plant chromosome by argon-ion laser beam[J].Theor Appl Genet.，1992，84：787-791)；通行的C带，对染色体DNA破坏太大，不利于构建完整的DNA文库；而有些植物染色体不仅小，而且大小差异不明显，带纹相似，难于精确识别染色体及其细微结构。所有这些都加大了分析的复杂性。