[发明专利]适于SLμCUT系统的小麦异代换系染色体标本制备及微切割方法

权利要求书

1.一种适于SL μCUT系统的小麦异代换系染色体标本制备及微切割方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)染色体标本的制备，得到目标染色体；

(2)目标染色体(片断)显微切割和分离，将一滴无水乙醇滴于处理好的带有目标染色体的分离膜上，覆盖一张干净的载玻片，置于载物台以备切割；切割时先在低倍镜下寻找分散好的目标染色体，然后转于高倍镜、下，进行切割，分离后的染色体被带有粘性的Eppendorf管收集。

2.根据权利要求1所述的适于SL μCUT系统的小麦异代换系染色体标本制备及微切割方法，其特征在于：步骤(1)所述染色体标本的制备包括以下步骤：

1)取材与固定：选取山农0095/烟农15杂种F₁大多数处于减数分裂中期I花粉母细胞，放于卡诺氏液固定3-24h，后转入70％酒精保存；

2)预处理：将花粉母细胞从保存液中取出，蒸馏水低渗处理10min；

3)酶解：用混合酶液在37℃的温度下酶解1h，蒸馏水冲洗10min；

4)制片：将花粉母细胞用无菌镊子捣碎于载玻片(盖玻片亦可)，然后覆膜压片将染色体“原位”转移到分离膜上，再将玻片与膜剥离，70％、100％酒精各脱水3min，最后制成染色体标本。

3.根据权利要求2所述的适于SL μCUT系统的小麦异代换系染色体标本制备及微切割方法，其特征在于：在步骤4)制片之前分离膜可以用紫外光照射或用多聚赖氨酸处理以增加粘性。

4.根据权利要求2所述的适于SL μCUT系统的小麦异代换系染色体标本制备及微切割方法，其特征在于：步骤1)所述的卡诺氏液由酒精和乙酸组成，两者的体积比为酒精∶乙酸＝3∶1。

5.根据权利要求2所述的适于SL μCUT系统的小麦异代换系染色体标本制备及微切割方法，其特征在于：步骤1)所述的混合酶液由2％纤维素酶和2％果胶酶(Sigma公司)混合而成，两者的重量比为纤维素酶∶果胶酶＝1∶1。