[发明专利]一种蛋白水解度的检测方法及用于检测的试剂盒

权利要求书

1.一种蛋白水解度的检测方法，其特征在于，按照下述步骤进行：

(一)制备标准曲线和标准对比卡

配置溶解液，并将酪蛋白溶于溶解液中，定容得到标准蛋白溶液；再配置测定液；然后将标准蛋白溶液、溶解液和测定液配置成不同浓度的系列溶液，在分光光度计可见光区540nm处测定吸光度，以标准蛋白质含量为横坐标、测定的吸光度值为纵坐标，绘制成标准曲线，制成标准比对卡

(二)检测样品中蛋白的水解度

分别向加工前与加工后的样品中加入沉淀液后静置，离心后去除上层清液，再向沉淀中加入洗脱液，离心后去除上层清液，然后向沉淀中加入溶解液，待溶解后向其中加入测定液，静置后，在540nm波长下进行吸光度测定，与标准比对卡进行比对，确定加工前后蛋白含量，二者的差值除以加工前蛋白含量即可计算出蛋白水解程度。

2.根据权利要求1所述的一种蛋白水解度的检测方法，其特征在于，所述溶解液选用氢氧化钾的水溶液；所述洗脱液选用乙醇和水的混合溶液；所述沉淀液选用三氯乙酸的水溶液。

3.根据权利要求2所述的一种蛋白水解度的检测方法，其特征在于，所述溶解液选用0.05摩尔/升的氢氧化钾水溶液；所述洗脱液为将分析纯乙醇与蒸馏水按19∶1体积比混合后得到；所述沉淀液按照下述方法制备，将固态三氯乙酸加热至60℃以上实现由固态向液态的转变后，再按照液态三氯乙酸和水3∶17的体积比与蒸馏水互溶；所述标准蛋白溶液按照下述方法制备，称取酪蛋白0.25克溶于溶解液中，定容到25毫升配成标准蛋白溶液。

4.根据权利要求1所述的一种蛋白水解度的检测方法，其特征在于，所述测定液按照下述步骤制备：配制质量百分数为10％的氢氧化钾水溶液，待用，再称取氯化铜、酒石酸钾钠和碘化钾溶解于蒸馏水中，搅拌加入质量百分数为10％的氢氧化钠水溶液，最后加蒸馏水定容到目标体积，使得各个溶质的最终质量百分数分别为氯化铜0.15％、酒石酸钾钠0.6％、碘化钾0.1％和氢氧化钾3％。

5.根据权利要求1所述的一种蛋白水解度的检测方法，其特征在于，将加工前与加工后的样品溶于溶解液中后，再吸取样品溶液加入沉淀液，进行检测。

6.一种用于检测蛋白水解度的试剂盒，其特征在于，包括溶解液、沉淀液、洗脱液、测定液及标准比对卡，其中：

所述溶解液选用氢氧化钾的水溶液

所述洗脱液选用乙醇和水的混合溶液

所述沉淀液选用三氯乙酸的水溶液

所述测定液按照下述步骤进行制备：配制质量百分数为10％的氢氧化钾水溶液，待用，再称取氯化铜、酒石酸钾钠和碘化钾溶解于蒸馏水中，搅拌加入质量百分数为10％的氢氧化钠水溶液，最后加蒸馏水定容到目标体积，使得各个溶质的最终质量百分数分别为氯化铜0.15％、酒石酸钾钠0.6％、碘化钾0.1％和氢氧化钾3％

所述标准比对卡按照下述方法进行测定：将酪蛋白溶于溶解液中，定容得到标准蛋白溶液；将标准蛋白溶液、溶解液和测定液配置成不同浓度的系列溶液，在分光光度计可见光区540nm处测定吸光度，以标准蛋白质含量为横坐标、测定的吸光度值为纵坐标，绘制成标准曲线，制成标准比对卡。

7.根据权利要求6所述的一种用于检测蛋白水解度的试剂盒，其特征在于，所述溶解液选用0.05摩尔/升的氢氧化钾水溶液；所述洗脱液选用乙醇和水的混合溶液，将分析纯乙醇与蒸馏水按19∶1体积比混合后得到；所述沉淀液选用三氯乙酸的水溶液，将固态三氯乙酸加热至60℃以上实现由固态向液态的转变后，再按照液态三氯乙酸和水3∶17的体积比与蒸馏水互溶；所述标准蛋白溶液按照下述方法制备，称取酪蛋白0.25克溶于溶解液中，定容到25毫升配成标准蛋白溶液。

8.一种利用如权利要求6所述的试剂盒进行蛋白水解度检测的方法，其特征在于，分别向加工前与加工后的样品中加入沉淀液后静置，离心后去除上层清液，再向沉淀中加入洗脱液，离心后去除上层清液，然后向沉淀中加入溶解液，待溶解后向其中加入测定液，静置后，在540nm波长下进行吸光度测定，与标准比对卡进行比对，确定加工前后蛋白含量，二者的差值除以加工前蛋白含量即可计算出蛋白水解程度。

9.根据权利要求8所述的利用试剂盒进行蛋白水解度检测的方法，其特征在于，测试中也可将加工前与加工后的样品溶于溶解液中后，再吸取样品溶液加入沉淀液，进行检测。