[发明专利]一种葡萄无性系品种的育种方法

说明书

技术领域

本发明涉及到果树育种技术领域，具体指利用现代生物技术(物理诱变)手段获得葡萄优良无性系品种即一种葡萄无性系品种的育种方法。

背景技术

葡萄为葡萄科、葡萄属植物，起源于黑海和地中海沿岸，是分布最广泛、适应性最强的果树之一，目前全世界已形成数千个品种。在我国，北起黑龙江，南至海南岛，各省市均有栽培。目前国内外对葡萄新品种选育的方法主要有杂交育种、芽变选种，随着现代生物技术的发展，使用组织培养技术、诱变技术、分子标记技术和转基因技术等新型育种技术培育新品种已经成为可能，但成功报道的例子甚少。

自然界葡萄容易产生芽变，目前栽培中部分优良品种由自然芽变选择培育成功，但自然芽变概率较低，利用人工诱变可以大大提高葡萄的变异概率，是选育葡萄优良品种的良好途径，但是利用人工诱变育种葡萄的方法还鲜有报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的状况，提供一种葡萄无性系品种选育的方法。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种葡萄无性系品种选育的方法，通过人工物理诱变的方式，获得抗病、早熟、优质的葡萄优良单株，该方法包括育种目标的的确定、育种材料的选取、物理诱变剂量的选择、苗木的培养、变异单株的筛选、变异性状的分子鉴别等，具体包括下述步骤：

(1)育种目标的确定：以抗病、早熟、优质为主要育种目标；

(2)育种材料的选取：一般选择具有良好经济性状(如产量等)但在某些性状(如成熟期、抗病性等需要改良的形状)需要改良的品种；诱变种子从品种纯正、已经进入盛果期、生长健壮、无病虫害的植株上采集；具体为当葡萄果实完全成熟(浙江省一般在8～10月份)，选择果穗整齐、果粒发育良好的果实采集种子；种子采集后选择饱满的种子，用清水反复冲洗洗净粘在种子表面的果肉，然后用20％多菌灵1000倍液浸泡15分钟消毒，再用清水冲洗后在阴凉处晾干；晾干的种子以5份沙子(沙子相对湿度60％左右)、1份种子混合后置于4～5℃的冰箱中贮藏；第二年2～3月将种子进行分组，每300粒为一组，分为6组，其中1组为对照，5组用于辐照处理；

(3)物理诱变剂量的选择：通过预备试验，采用100、150、200、250、300Gy(5组用于辐照处理，每组对应一组辐射强度)的⁶⁰Coγ射线分别对应五组要辐照处理的种子进行急性辐射，以无辐射处理为对照，剂量率为10Gy/min；

(4)种子的播种：种子播种于育苗床上；育苗床基质为体积比6∶4的泥炭和谷壳的混合物，基质装盆前用高压灭菌锅进行消毒，育苗基质含有有机质30～45g·kg^-1，碱解氮100～130mg·kg^-1，速效磷80～95mg·kg^-1，速效钾200～230mg·kg^-1，pH6.0～7.5；苗床底部铺8～10cm厚的卵石、再铺4～6cm厚的沙子，上层铺25～30cm厚育苗基质；将处理和对照的种子均匀播种于苗床上，行株距10×10cm；播种后注意苗床基质相对湿度保持60～70％；

(5)苗木的管理：播种后14～15天发芽，当小苗长至5～6叶时定植于大棚设施中；畦宽2.5m，定植前挖定植沟，定植沟内加疏松且已经消毒的土壤，株距0.5m，大棚内的温度保持20～25℃，大棚内土壤相对湿度保持60～65％，空气相对湿度保持65～75％，培育3～6年后植株开花结果；

(6)变异单株的筛选：在苗木生长期间，仔细观测不同处理的生物学、植物学性状，选择与对照(对照组苗木)在抗性、植物学和生物学特性等方面有明显差异的单株；

(7)变异性状的分子鉴别：选择优良单株，采集该优良与对照的幼嫩叶片，利用ISSR或者SSR标记技术进行变异基因分析；

(8)优良单株的区域试验和推广：通过生物学、植物学性状以及结果特性的观测，结合分子鉴别，获得优良单株；将该单株进行无性繁殖，选择不同的区域进行试验，以明确其适种范围，并总结适合该单株的一整套栽培措施。

上述步骤(4)中育苗基质优选含有有机质38g·kg^-1，碱解氮110mg·kg^-1，速效磷87mg·kg^-1，速效钾237mg·kg^-1，pH6.3。

上述步骤(4)中苗床底部优选铺10cm厚的卵石、再铺5cm厚的沙子，上层铺25cm厚育苗基质。

上述步骤(4)中播种后苗床基质相对湿度优选保持60％。