[发明专利]一种葡萄无性系品种的育种方法

权利要求书

1.一种葡萄无性系品种的育种方法，其特征在于：通过人工物理诱变的方式，获得抗病、早熟、优质的葡萄优良单株。

2.根据权利要求1所述的一种葡萄无性系品种的育种方法，其特征在于：育种方法的具体步骤包括：

(1)育种目标的确定：以抗病、早熟、优质为主要育种目标；

(2)育种材料的选取：选择具有良好经济性状但在某些性状需要改良的品种，诱变种子从品种纯正、已经进入盛果期、生长健壮、无病虫害的植株上采集；当葡萄果实完全成熟，选择果穗整齐、果粒发育良好的果实采集种子，种子采集后选择饱满的种子，用清水反复冲洗洗净粘在种子表面的果肉，然后用20％多菌灵1000倍液浸泡15分钟消毒，再用清水冲洗后在阴凉处晾干；晾干的种子用5份沙子、1份种子混合后置于4～5℃的冰箱中贮藏；第二年2～3月将种子进行分组，每300粒为一组，分为6组，其中1组为对照，5组用于辐照处理；

(3)物理诱变剂量的选择：通过预备试验，采用100、150、200、250、300Gy的⁶⁰Coγ射线分别对应五组要辐照处理的种子进行急性辐射，以无辐射处理为对照，剂量率为10Gy/min；

(4)种子的播种：种子播种于育苗床上；育苗床基质为体积比6∶4的泥炭和谷壳的混合物，基质装盆前用高压灭菌锅进行消毒，育苗基质含有有机质30～45g·kg^-1，碱解氮100～130mg·kg^-1，速效磷80～95mg·kg^-1，速效钾200～230mg·kg^-1，pH6.0～7.5；苗床底部铺8～10cm厚的卵石、再铺4～6cm厚的沙子，上层铺25～30cm厚育苗基质；将处理和对照的种子均匀播种于苗床上，行株距10×10cm；播种后注意苗床基质相对湿度保持60～70％；

(5)苗木的管理：播种后14～15天发芽，当小苗长至5～6叶时定植于大棚设施中；畦宽2.5m，定植前挖定植沟，定植沟内加疏松且已经消毒的土壤，株距0.5m，大棚内的温度保持20～25℃，大棚内土壤相对湿度保持60～65％，空气相对湿度保持65～75％，培育3～5年后植株开花结果；

(6)变异单株的筛选：在苗木生长期间，仔细观测不同处理的生物学、植物学性状，选择与对照在抗性、植物学和生物学特性方面有明显差异的单株；

(7)变异性状的分子鉴别：选择优良单株，采集该优良与对照的幼嫩叶片，利用ISSR或者SSR标记技术进行变异基因分析；

(8)优良单株的区域试验和推广：通过生物学、植物学性状以及结果特性的观测，结合分子鉴别，获得优良单株；将该单株进行无性繁殖，选择不同的区域进行试验，以明确其适种范围，并总结适合该单株的一整套栽培措施。

3.根据权利要求2所述的一种葡萄无性系品种的育种方法，其特征在于：所述步骤(4)中育苗基质含有有机质38g·kg^-1，碱解氮110mg·kg^-1，速效磷87mg·kg^-1，速效钾237mg·kg^-1，pH6.3。

4.根据权利要求2所述的一种葡萄无性系品种的育种方法，其特征在于：所述步骤(4)中苗床底部铺10cm厚的卵石、再铺5cm厚的沙子，上层铺25cm厚育苗基质。

5.根据权利要求2所述的一种葡萄无性系品种的育种方法，其特征在于：所述步骤(4)中播种后苗床基质相对湿度保持在60％。

6.根据权利要求2所述的一种葡萄无性系品种的育种方法，其特征在于：所述步骤(7)中利用ISSR或者SSR标记技术进行变异基因分析其葡萄ISSR-PCR的反应体系为：20μLPCR反应体积中，MgCl₂1.75mmol/L，dNTPs 0.20mmol/L，Taq聚合酶1.0U，引物0.2μmol/L，10×Buffer 2.0μL，ddH₂O 13.2μL。

7.根据权利要求6所述的一种葡萄无性系品种的育种方法，其特征在于：所述PCR反应的反应程序为：94℃预变性5min，94℃变性45s，50～60℃退火1min，72℃延伸1.5min，进行40个循环，最后72℃延伸7min。