[发明专利]快速检测新疆出血热病毒的荧光定量RT-PCR试剂盒

权利要求书

1.快速检测新疆出血热病毒的荧光定量RT-PCR试剂盒，其特征是包括以下试剂：

（1）RT-PCR反应试剂盒，内含25×RT-PCR酶混合液：包含反转酶、热启动Taq酶；2×RT-PCR反应buffer和ROX阳性参照染料；

（2）正向引物100μL，浓度为12.5μM；

（3）反向引物100μL，浓度为17.5μM；

（4）荧光探针50μL，浓度为12.5μM；

（5）无菌DEPC水：5mL；

（6）阳性对照：即含有新疆出血热病毒特异的基因片断的质粒；

（7）阴性对照：无菌DEPC处理水；

所述引物对及荧光探针是合成的DNA片段，碱基序列分别为：

正向引物：5’-TGACAGCATT TCTTTAACAGACATCA-3’，

反向引物：5’-AAACACGGCAGCCTTAAGCA-3’，

荧光探针：5’-FAM-TCGCCAGGGACTTTATATTCTGCAAGG-TAMRA-3’。

2.采用权利要求1所述试剂盒检测新疆出血热病毒的方法：

（1）提取待测样品的RNA；

（2）RT-PCR扩增，方法如下：

在RT-PCR试剂管内加入25×RT-PCR酶混合液1μl，2×RT-PCR反应buffer12.5μl，正向引物1μl，反向引物1μl，荧光探针0.5μl，模板RNA 100pg至1μg（≤ 5 μl），用DEPC处理水补充至25μl；瞬时离心混匀；同时设立阴性对照和阳性对照一起置RT-PCR仪扩增：扩增条件为：45℃反应10分钟；95℃反应15分钟；进入扩增循环，95℃反应15秒，60℃反应45秒，循环40次；

（3）RT-PCR结果判定：

无Ct值或Ct＞45，且无明显扩增曲线，判定为阴性；

Ct≤40，并有明显扩增曲线，判定为阳性；

40＜Ct≤45，重新检测，若见有明显扩增曲线，则为阳性，否则为阴性。