[发明专利]蛹虫草腺苷的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种蛹虫草腺苷的提取方法，属于生物制品加工技术领域。

背景技术

蛹虫草，又名北冬虫夏草，蛹草，北虫草，蛹草菌等，分类学上属于真菌门，子囊菌亚门，核菌纲，球壳目，麦角菌科，虫草属。 它是中国的一味传统中药，具有巨大的药用价值。

蛹虫草中含有多种化学成分，具有多种药用功效，与冬虫夏草的药理功能和临床效果相似，但价格却远远低于冬虫夏草，因此蛹虫草逐渐成为冬虫夏草的替代品，具有极大的潜在市场。

常规提取方法如水提法，水提醇沉法，醇提法等，提取过程单一，无法彻底提取蛹虫草中的有效成分。同时这些提取方法在保留有效成分，弃除无效成分方面，仍存在提取不够充分，有效成分损失大，工序多，周期长，成本高等缺点。且常规提取方法难以破除蛹虫草坚硬的细胞壁，给提取过程带来很大的困难，造成很大的浪费与损失。 

发明内容

有鉴于此，本发明的目的是提供一种蛹虫草腺苷的提取方法。

为达到上述目的，本发明提供一种蛹虫草腺苷的提取方法，所述方法为超微粉碎、反复冻融、微波提取和半仿生提取的组合，具体包括以下步骤：

(1)蛹虫草的培养：以蚕蛹为主要原料，大米为辅料对蛹虫草进行培养，包括如下步骤：

a. 蛹虫草培养基的配制：培养基配方为干蚕蛹粉130~140g/L；大米粉60~65g/L；磷酸二氢钾1.2 ~1.5g/L；磷酸二氢钠0.8~1.2 g/L；加水先溶解KH₂PO₄、NaH₂PO₄、充分混匀后再加入上述干蚕蛹粉、大米粉混合均匀，匀浆，分装，每瓶装50 ml，盖好盖子，于121℃，1.1Mpa的条件下湿热灭菌30~45 min，冷却后备用；

b.接种：于步骤a所得蛹虫草培养基中接种蛹虫草菌种(蛹虫草为Cordyceps militaris(L.) Link)，其密度为3～5个菌球/mL，所述蛹虫草培养基与所述蛹虫草菌种的体积比为50:1，接种后于22℃、湿度75～85%的条件下避光培养3～5天，使虫草菌丝迅速长满培养基表面，然后进行以下光照培养； 

第一阶段生长培养：在生长期第5～20天内光照培养，白天12小时自然光光照，温度20~22℃(优选为22℃)、湿度80～85%，光照强度控制在100～150Lx；晚上12小时闭光，温度18~20℃(优选为18℃)、湿度75～85%，每天通风2次，早晚各一次，每次通风20～30分钟；

第二阶段生长培养：在生长期第20～35天内，白天12小时自然光加日光灯光照，温度20~22℃(优选为22℃)、湿度75%～85%，光照强度控制在1000~1200 Lx；晚上12小时闭光，温度18~20℃(优选为18℃)、湿度75～85%，每天通风2次，早晚各一次，每次通风时间为20～30分钟；

c. 旋开培养瓶盖，镊子用75%酒精消毒后，将步骤b所得培养基上面的子实体取出，将取出的子实体置于干净的不锈钢盘中，挑选色泽均匀、粗壮、完整的子实体，去除残存的培养基后置于新的不锈钢盘中称重备用；培养瓶中剩余部分按第20~35天的培养条件及方法继续培养后用于再次收获；

d.烘干：将步骤c所得蛹虫草子实体置于垫有纱布的不锈钢盘中，均匀铺开，30~37℃热风循环烘干待用，水分含量最终控制在10%以下；

(2)低温超微粉碎：

每次称取100g~200g烘干的蛹虫草子实体，放入超微粉碎机中粉碎3~10 分钟，粉碎时用2℃~10℃的水作为冷却液，降低粉碎温度，保护蛹虫草中的腺苷；

(3) 反复冻融提取：称取100g~150g的蛹虫草超微粉碎粉末，向蛹虫草超微粉碎粉末中加入5~30倍体积（按照1g的物料加提取剂1ml计算）的超纯水后于-80℃的冰箱中冷冻2~6小时，以使细胞内迅速形成大的冰晶，充分破坏细胞结构；冷冻结束后于20~60℃的水浴锅中迅速解冻，加强细胞的损坏程度；如此反复冻融3~7次，反复冻融结束后以8000g~12000g的离心力在离心机中离心5~30分钟，收集上清，沉淀自然风干后继续提取；

 (4)蛹虫草腺苷的半仿生微波加热提取包括：

a. pH值为4.5~5.5的酸性水的配制：用36%~38%的盐酸溶液调节超纯水的pH值为4.5~5.5即为酸性水；