[发明专利]蛹虫草腺苷的提取方法

权利要求书

1.一种蛹虫草腺苷的提取方法, 其特征在于，所述方法为超微粉碎、反复冻融、微波提取和半仿生提取多种工艺的组合，具体包括以下步骤： 

(1) 蛹虫草的培养：以蚕蛹为主要原料，大米为辅料对蛹虫草进行培养；

(2) 低温超微粉碎：通过低温超微粉碎技术破除蛹虫草子实体坚硬的细胞壁；

(3)反复冻融提取：反复冻融超微粉碎粉末3~7次，以使蛹虫草细胞壁破除更充分，同时损坏胞质内的细胞器结构，以利于蛹虫草中腺苷的溶出；

(4)半仿生微波加热提取：分别在pH值为4.5~5.5的酸性水，pH值为6.5~7.5的中性磷酸钠缓冲液和pH值为8.0~8.5的碱性水中对蛹虫草中的腺苷进行3次连续提取。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)包括：

a. 蛹虫草培养基的配制：培养基配方为干蚕蛹粉130~140 g/L；大米粉60~65 g/L；磷酸二氢钾1.2 ~1.5g/L；磷酸二氢钠0.8~1.2 g/L；加水先溶解KH₂PO₄、NaH₂PO₄、充分混匀后再加入上述干蚕蛹粉、大米粉混合均匀，匀浆，分装，每瓶装50 ml，盖好盖子，于121℃，1.1Mpa的条件下湿热灭菌30~45 min，冷却后备用；

b.接种：于步骤a所得蛹虫草培养基中接种蛹虫草菌种，其密度为3～5个菌球/mL，所述蛹虫草培养基与所述蛹虫草菌种的体积比为50:1，接种后于22℃、湿度75～85%的条件下避光培养3～5天，使虫草菌丝迅速长满培养基表面，然后进行以下光照培养； 

第一阶段生长培养：在生长期第5～20天内光照培养，白天12小时自然光光照，温度20~22℃、湿度80～85%，光照强度控制在100～150Lx；晚上12小时闭光，温度18~20℃、湿度75～85%，每天通风2次，早晚各一次，每次通风20～30分钟；

第二阶段生长培养：在生长期第20～35天内，白天12小时自然光加日光灯光照，温度20~22℃、湿度75%～85%，光照强度控制在1000~1200 Lx；晚上12小时闭光，温度18~20℃、湿度75～85%，每天通风2次，早晚各一次，每次通风时间为20～30分钟；

c.收获及再培养：旋开培养瓶盖，镊子用75%酒精消毒后，将步骤b所得培养基上面的子实体取出，将取出的子实体置于干净的不锈钢盘中，挑选色泽均匀、粗壮、完整的子实体，去除残存的培养基后置于新的不锈钢盘中称重备用；培养瓶中剩余部分按第20~35天的培养条件及方法继续培养后用于再次收获；

d.烘干：将步骤c所得蛹虫草子实体置于垫有纱布的不锈钢盘中，均匀铺开，30~37℃热风循环烘干待用，水分含量最终控制在10%以下。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤b中的蛹虫草为Cordyceps militaris(L.) Link.，蛹虫草菌种为蛹虫草液体菌种。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)包括：

每次称取100~200 g烘干的蛹虫草子实体，放入超微粉碎机中粉碎3~10 min，粉碎时用2~10℃的水作为冷却液，以降低粉碎温度，保护蛹虫草中腺苷的活性。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)包括：

称取100g~150g的蛹虫草超微粉碎粉末，向该蛹虫草超微粉碎粉末中加入5~30倍体积的超纯水后于-80℃的冰箱中冷冻2~6小时，以使细胞内迅速形成大的冰晶，冷冻结束后于20~60℃的水浴锅中迅速解冻，如此反复冻融3~7次；反复冻融结束后以8000g~12000g的离心力在离心机中离心5~30分钟，收集上清，沉淀自然风干后继续提取。