[发明专利]通过降低腺嘌呤核苷酸转运体2mRNA的表达治疗乳腺癌的方法

说明书

技术领域

本发明涉及通过降低腺嘌呤核苷酸转运体2mRNA的表达治疗乳腺癌的方法。更加具体而言，本发明涉及通过ANT2siRNA（小干扰RNA）或ANT2shRNA（短发夹RNA）治疗乳腺癌的方法。

背景技术

肿瘤是由异常的、不受控制的且失调的细胞增殖（包括过度的异常细胞增殖）引起的。当肿瘤表现出破坏性增殖、渗透和转移时，将该肿瘤划分为恶性肿瘤。具体而言，从分子生物学的角度来说，肿瘤被认为是由基因突变引起的遗传性疾病。为了治疗恶性肿瘤，已单独实施或联合实施外科手术、放疗和化疗这三种治疗方法。具体而言，外科手术为一种根除大部分致病组织的方法，因此该方法非常有效地除去正在乳房、结肠和皮肤中生长的肿瘤，但是该方法无法同样有效地治疗脊椎中的肿瘤和弥散性肿瘤。

放疗已被用于治疗急性炎性肿瘤、良性或恶性肿瘤、内分泌失调和过敏症，并且放疗有效治疗这些由异常的快速细胞分裂引起的恶性肿瘤。然而，放疗带来严重的副作用，例如，功能失调或正常细胞缺损，在治疗区域上爆发皮肤疾病，尤其在儿童中引起发育迟缓和骨发育不全。

化疗为阻碍癌细胞复制或代谢的方法，该方法已被用于治疗乳腺癌、肺癌和睾丸癌。这种治疗方法的最大的问题在于全身化疗所带来的副作用。这种化疗的副作用是致命的，由此增加了对该治疗的焦虑和恐惧。化疗的代表性的副作用之一为剂量限制毒性（DLT）。粘膜炎为各种抗癌药剂（抗代谢剂（例如，5-氟尿嘧啶和甲氨蝶呤）和抗肿瘤抗生素（例如，阿霉素））的DLT实例之一。大多数副作用病例需要住院治疗或至少需要止痛药。因此，化疗和放疗带来的副作用是癌症患者的治疗中的重要问题。

同时，基因疗法是以DNA重组技术为基础的，该基因疗法为将治疗性基因插入癌症患者细胞以校正基因缺损或向失调细胞赋予新的功能以治疗或预防由突变疾病、基因感染、疾病、癌症、自体免疫性心血管疾病等引起的各种遗传性疾病的方法。更加具体而言，基因疗法为通过将治疗性基因运送至靶器官中，诱导正常蛋白或治疗性靶蛋白的细胞内表达治疗所述疾病的方法。基因疗法相对于使用药物的其他疗法而言具有非常好的选择性，并且可长期使用，对疑难疾病具有改善的治疗效果。为了提高基因疗法的疗效，基因转移技术对于在靶细胞中实现高效基因表达而言是必不可少的。

基因载体为将治疗性基因插入靶细胞中的媒介。优选的基因载体为对人体无害，可大量生产并能够有效传递治疗性基因且诱导治疗性基因稳定表达的一种基因载体。因此，基因转移技术为基因疗法中的关键因素并且迄今为止，基因疗法中最需要的代表性的基因载体以病毒载体（例如，腺病毒、腺相关病毒（AVV）以及逆转录病毒）和非病毒载体（例如，脂质体和聚乙烯亚胺）为例。

基因疗法的治疗方案中的一种为通过使用肿瘤抑制基因、肿瘤特异性杀伤病毒、自杀基因和免疫调节基因控制肿瘤细胞。具体而言，使用肿瘤抑制基因的方法为通过运送肿瘤抑制基因的原始形式（例如，p53，其在许多癌症患者体内为缺失的或突变的）治疗癌症。使用肿瘤特异性杀伤病毒的方法为通过利用转化到癌组织中的肿瘤抑制基因的活性，将病毒基因载体运送进入癌症患者体内治疗癌症，所述病毒基因载体可在肿瘤细胞中选择性增殖。上述两种方法的基本治疗方案为直接杀死肿瘤细胞。同时，使用自杀基因的方法为通过插入诸如HSK-TK之类的敏感性基因诱导肿瘤细胞自杀。使用免疫调节基因的方法为通过递送增加抗肿瘤免疫反应的基因（例如，白介素12（IL12）、白介素4（IL4）、白介素7（IL7）、γ-干扰素和肿瘤坏死因子（TNF））刺激T-细胞介导的肿瘤细胞识别或通过干扰诱导肿瘤的蛋白质诱导细胞凋亡间接治疗疾病。

对于为了治疗癌症而进行的各种尝试中的基因疗法而言，本发明的发明人选择ANT2（腺嘌呤核苷酸转运体2）作为靶基因以研发有效且安全的抗癌药剂。

ANT（腺嘌呤核苷酸转运体）为在线粒体内膜（IM）中发现的酶，其通过线粒体外膜（OM）的VDAC（电压依赖性阴离子通道）输入来自细胞质的ADP并将电子传递链系统中产生的ATP输出至细胞质中（HLA Vieira等人,Cell Death and Differentiation,7,1146-1154,2000）。

本领域还已知在细胞的能量代谢中发挥关键作用的ANT被分为ANT1、ANT2和ANT3。具体而言，ANT2在正常细胞中表现出低表达速率但在癌细胞或类似高度增殖的细胞中高表达，这看起来与厌氧条件下的糖酵解密切相关，这样，ANT2开始作为癌症治疗中的新靶标（Chevrollier,A等人，Med.Sci.,21(2),156-161,2005）。

发明内容