[发明专利]包含锁定核苷酸的微RNA抑制剂

说明书

对相关申请的交叉引用

本申请要求在2010年12月15日提交的美国临时申请第61/423,456号，和2011年6月9日提交的美国临时申请第61/495,224号的优先权和权益，并将其全文通过提述并入本文。

发明领域

本发明涉及用于微RNA（miRNA或miR）抑制剂的化学基序（motif），并特别涉及化学修饰的miRNA反义寡核苷酸，其当施用于患者时，在强度（potency）、递送效率、靶特异性、稳定性和/或毒性方面具有优势。

发明背景

已经发现微RNA（miRs）牵涉许多的生物过程，包括心脏功能的调控和维持（见Eva Van Rooij和Eric Olson,MicroRNAs:Powerful new regulators of h eart disease and proactive therapeutic targets,J.Clin.Invest.117(9):2369-2376(2007);Chien KR,Molecular Medicine:MicroRNAs and the tell-tale heart,Nature447,389-390(2007)）。因此miRs代表了状况的治疗目标的一个相对较新的类，所述状况如心脏肥大（cardiac hypertrophy）、心肌梗死（myocardial infraction）、心力衰竭（heart failure）、血管损坏（vascular damage）、和病理性心脏纤维化（pathologic cardiac fibrosis）等等。miRs是小的、不编码蛋白的RNA，其长度从大约18到大约25个核苷酸，并通过下述方式充当靶mRNA的阻抑物：当它们的序列完美互补时，通过促进靶mRNA的降解；或当它们的序列含有错配（mismatch）时，通过抑制靶mRNA的翻译。该机理牵涉将成熟miRNA纳入RNA诱导的沉默复合体（RNA-induced silencing complex，RISC），其中它与自己的靶RNA通过碱基-对互补而缔合。

反义多核苷酸或模拟miRNA功能的多核苷酸(“拟miRNA”(“miRNA mimetic”))可以治疗性靶定miRNA功能。然而。用基于寡核苷酸的作用剂治疗性靶定miRNA提出几个挑战，包括RNA-结合亲和力和特异性、细胞摄取的效率和核酸酶（nucleases）抗性。例如，当将多核苷酸引入完整的细胞时，它们会受到核酸酶的攻击和降解，导致活性丧失。虽然已经制备了多核苷酸类似物以试图避免其降解，例如通过2'取代的方式（B.Sproat等,Nucleic Acids Research17(1989),3373-3386），修饰经常影响多核苷酸的意图的生物学作用的强度。这种强度的降低，在每一种情况下，可以是由于修饰的多核苷酸不能与靶RNA形成稳定的双链体（duplex）和/或丢失与细胞机构（cellular machinery）的相互作用。其它的修饰还包括使用锁定核酸，其具备改进RNA-结合亲和力的潜力。Veedu RN和Wengel J,Locked nucleic acid as a novel class of therapeutic agent.RNA Biology6:3,321-323(2009)。

用于miRNA抑制剂的寡核苷酸化学型（chemistry patterns）或基序具有改进抑制剂的递送、稳定性、强度、特异性、和/或毒性概貌（toxicity profile）的潜力，并且这些对于在治疗语境下有效地靶向miRNA功能而言是需要的。

发明概述

本发明提供了化学修饰的寡核苷酸，其能够抑制miR-208家族miRNA，包括miR-208a、miR-208b、和/或miR-499的表达（例如丰度）。本发明进一步提供了包含所述寡核苷酸的药物组合物以及治疗有涉及或牵涉miR-208家族miRNA的状况或病症的患者。这类的状况包括各种心血管状况。在多个实施方案中，所述寡核苷酸提供了强度、递送效率、靶特异性、毒性和/或稳定性方面的一种或多种优势。