[发明专利]获得抗旱植物的方法

权利要求书

1.一种从细胞群体中选择遗传转化植物细胞的方法，其不使用编码所述细胞对抗生素、除草剂和/或毒性物质的抗性的选择基因，其中所述方法包含：

a）将遗传转化细胞的至少一个相关核苷酸序列和至少一个核苷酸选择序列引入细胞或细胞群体中，其中所述核苷酸选择序列包含编码内源性海藻糖酶的抑制因子的区域；

b）使所述转化和非转化细胞群体与含有足以使其存活的渗透压调节剂的培养基接触；和

c）根据优于未转化细胞的竞争优势来选择至少一部分遗传转化细胞，其中所述遗传转化细胞携带编码海藻糖酶抑制因子的核苷酸序列，所述核苷酸序列产生与从编码内源性海藻糖酶的DNA序列产生的RNA互补的RNA，其中由引入的所述核苷酸序列产生的所述RNA赋予在具有所述渗透压调节剂的所述培养基中的竞争优势。

2.根据权利要求2所述的方法，其中所述选择核苷酸序列是编码海藻糖酶的核苷酸序列；所述序列产生与从编码内源性海藻糖酶的DNA序列产生的RNA互补的RNA。

3.根据权利要求1和2所述的方法，其中所述引入的选择核苷酸序列是紫花苜蓿海藻糖酶（紫苜蓿（Medicago sativa））的基因或MSTRE基因的一个区域和/或编码玉米海藻糖酶的序列。

4.根据前述权利要求所述的方法，其中更确切地，所述引入的选择核苷酸序列与紫花苜蓿海藻糖酶的基因或MSTRE1基因的一个区域互补。

5.根据前述权利要求所述的方法，其中从所述选择核苷酸序列转录的所述RNA与从编码内源性海藻糖酶的DNA序列产生的所述RNA完全或部分互补。

6.根据权利要求5所述的方法，其中对所述引入的选择核苷酸序列进行修饰或截短。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述选择核苷酸序列编码蟑螂（美洲大蠊（Periplaneta americana））的85kD蛋白质、与维利霉素A（validamyzin A）、海藻唑啉（trehazoline）、海藻斯汀（trehalostine）、卡斯利辛（casteligine）、苏达斯汀（sudatestrine）或任何海藻糖酶抑制因子或其任何修饰物的代谢有关的酶，其中所述引入的选择核苷酸序列赋予所述细胞竞争优势。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述培养基包含从聚乙二醇8000（PEG8000）、甘露糖醇、山梨糖醇、NaCl或任何其他渗透压调节剂中选出的渗透压调节剂。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述培养基包含聚乙二醇8000（PEG8000）作为渗透压调节剂。

10.根据权利要求8所述的方法，其中所述培养基包含4%浓度的PEG8000。

11.根据前述权利要求所述的方法，其中所述遗传转化细胞尤其是从例如西红柿（Lycopersicum esculentum L.）、芒果、桃、苹果、梨子、香蕉、甜瓜、向日葵、烟草、甘蔗（Saccharum officinarum L.）、小麦（Triticum aestivum L.）、大豆（Glycine max L.）、大麦、玉米（Zea mays L.）、棉花、马铃薯（Solanum tuberosum L.）、胡萝卜、莴苣、南瓜、洋葱等植物中选出。

12.根据权利要求1到11所述的方法，其中所述选择细胞是遗传转化植物细胞，其具有在含有渗透压调节剂的培养基中生长的所述竞争优势，使得所述细胞可在干旱条件下生长和存活。

13.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞或细胞群体也使用相关核苷酸序列来转化。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述引入的相关核苷酸序列可以是编码海藻糖-6-磷酸合成酶（TPS）、海藻糖-6-磷酸酶（TPP）的序列和/或编码对毒素、抗生素、除草剂或其他生物技术相关产品的抗性的核苷酸序列。

15.根据权利要求1所述的方法，其中所述植物细胞转化是使用用于获得遗传转化细胞的分子构筑体或载体进行，所述分子构筑体或载体含有与至少一个相关核苷酸序列和至少一个选择核苷酸序列可操作地连接的植物启动子，其中所述选择核苷酸包含编码内源性海藻糖酶抑制因子的区域。