[发明专利]新的杂合启动子及包含其的重组载体

说明书

技术领域

本发明涉及一种杂合启动子(hybrid promoter)，其中，可操作地相互连接有整个或部分的CMV增强子、整个或部分的β-肌动蛋白启动子、整个或部分的CMV启动子、以及整个或部分的β-肌动蛋白内含子；一种含有所述启动子的重组载体；一种经所述重组载体转化的转化体；一种含有所述重组载体或转化体的药物组合物；以及一种利用所述重组载体或转化体制备目标蛋白的方法。

背景技术

为了在宿主细胞中表达目标基因，需要有表达载体，和能够携带感兴趣的结构基因并使其在细胞中表达的基因转移技术。在这方面，能够表达所插入其中的DNA片段的表达载体通常包括调控元件，如启动子或增强子。这类调控元件有利于表达与其可操作地连接的目标基因。表达载体可根据宿主细胞类型、目标基因表达水平、需要表达的类型等来选择，为了达到所需的目的，已经开发出了各种表达载体。

发明内容

技术问题

因此，本发明人尝试开发了一种适于提高目标蛋白表达水平的表达载体，并发现了一种杂合启动子能够显著提高目标蛋白的表达水平，从而完成了本发明，所述杂合启动子中可操作地连接有整个或部分的CMV增强子、整个或部分的β-肌动蛋白启动子、整个或部分的CMV启动子、及整个或部分的β-肌动蛋白内含子。

解决方案

本发明的一个目的是提供一种杂合启动子，其中，可操作地相互连接有整个或部分的CMV增强子、整个或部分的β-肌动蛋白启动子、整个或部分的CMV启动子、及整个或部分的β-肌动蛋白内含子。

本发明的另一目的是提供一种重组载体，其含有所述杂合启动子和与其可操作地连接的目标蛋白编码基因。

本发明的又一目的是提供一种引入重组载体的转化体。

本发明的又一目的是提供一种药物组合物，其包含所述重组载体或所述转化体。

本发明的又一目的是提供一种制备目标蛋白的方法，包括以下步骤：

1）培养本发明的转化体；

2）从所述转化体中诱导目标蛋白的表达；和

3）从所述转化体或其培养液中获得所表达的目标蛋白。

本发明的有益效果

本发明涉及一种为生产抗体或DNA疫苗而作优化新型杂合启动子。当多种目标基因插入含有所述杂合启动子的重组载体时，能够增强目标基因的转录和表达。因此，含有本发明杂合启动子的重组载体能够有效地应用于抗体的开发或DNA疫苗的生产。

附图说明

图1显示了用作本发明的起始载体的pGL3-基础载体的结构；

图2显示了pGL3-启动子(SV40)载体的结构，其中pGL3-基础载体中引入了SV40启动子；

图3显示了pGL3-BA载体的结构，其中pGL3-基础载体中引入了β-肌动蛋白启动子；

图4显示了用于本发明pcDNA3.1载体的CMV启动子TATA盒区；

图5显示了pGL3-B/C_TA载体的结构，其中，pGL3-基础载体中引入了含有β-肌动蛋白启动子(1.9kb)及CMV启动子TATA盒区(130bp)的杂合启动子；

图6显示了pGL3-B/C_TA/B_in载体的结构，其中，pGL3-基础载体中引入了含有β-肌动蛋白启动子(1.9kb)、CMV启动子TATA盒区(130bp)及β-肌动蛋白内含子区的杂合启动子；

图7显示了pGL3-U/C_TA/B_in载体的结构，其中，pGL3-基础载体中引入了含有β-肌动蛋白启动子(150bp)、CMV启动子TATA盒区(130bp)及β-肌动蛋白内含子区的杂合启动子；

图8显示了pGL3-C_eh/U/C_TA/B_in的结构，其中，pGL3-基础载体中引入了含有β-肌动蛋白启动子(150bp)、CMV启动子TATA盒区(130bp)、β-肌动蛋白内含子区及CMV增强子区的杂合启动子；和

图9显示了由上述各载体转化的CHO细胞中荧光素酶表达水平的比较结果。

最佳实施方式

在一实施例中，本发明提供了一种杂合启动子，其中可操作地相互连接有整个或部分的CMV增强子、整个或部分的β-肌动蛋白启动子、整个或部分的CMV启动子、以及整个或部分的β-肌动蛋白内含子。