[发明专利]新的杂合启动子及包含其的重组载体

权利要求书

1.一种杂合启动子，其含有整个或部分的CMV增强子、整个或部分的β-肌动蛋白启动子、整个或部分的CMV(巨细胞病毒)启动子、及整个或部分的β-肌动蛋白内含子，其特征在于，所述的CMV增强子、β-肌动蛋白启动子、CMV启动子以及β-肌动蛋白内含子相互可操作地连接。

2.如权利要求1所述的杂合启动子，其特征在于，所述的β-肌动蛋白启动子由选自下组的一个或多个DNA片段组成：

i）含有如SEQ ID NO：9所示核苷酸序列的DNA片段，

ii）含有如SEQ ID NO：10所示核苷酸序列的DNA片段，或

iii）在i)和ii）所述的DNA片段的核苷酸序列中具有一个或多个核苷酸的缺失、取代或插入的DNA片段，其具有启动子活性和调控可操作地连接在该启动子下游的目标基因表达的活性。

3.如权利要求1所述的杂合启动子，其特征在于，所述的β-肌动蛋白启动子是CHO(中国仓鼠卵巢)细胞的β-肌动蛋白启动子。

4.如权利要求1所述的杂合启动子，其特征在于，所述的CMV启动子是TATA盒区。

5.如权利要求4所述的杂合启动子，其特征在于，所述的CMV启动子的TATA盒区由以下DNA片段组成：

i）含有如SEQ ID NO：11所示核苷酸序列的DNA片段，或

ii）在i)所述的DNA片段的核苷酸序列中具有一个或多个核苷酸的缺失、取代或插入的DNA片段，其具有启动子活性和调控可操作地连接在该启动子下游的目标基因表达的活性。

6.如权利要求1所述的杂合启动子，其特征在于，所述的β-肌动蛋白内含子由以下DNA片段组成：

i）含有如SEQ ID NO：9所示核苷酸序列的DNA片段，或

ii）在i)所述的DNA片段的核苷酸序列中具有一个或多个核苷酸的缺失、取代或插入的DNA片段，其具有启动子活性和调控可操作地连接在该启动子下游的目标基因表达的活性。

7.如权利要求1所述的杂合启动子，其特征在于，所述的CMV增强子由以下DNA片段组成：

i）含有如SEQ ID NO：11所示核苷酸序列的DNA片段，或

ii）在i)所述的DNA片段的核苷酸序列中具有一个或多个核苷酸的缺失、取代或插入的DNA片段，其具有启动子活性和调控可操作地连接在该启动子下游的目标基因表达的活性。

8.如权利要求1所述的杂合启动子，其含有如SEQ ID NO.:13所示的CMV增强子、如SEQ ID NO.:11所示的CMV启动子TATA盒区、如SEQ ID NO.:9所示的β-肌动蛋白启动子，以及如SEQ ID NO.:12所示的β-肌动蛋白内含子区。

9.如权利要求1所述的杂合启动子，其含有如SEQ ID NO.:13所示的CMV增强子、如SEQ ID NO.:11所示的CMV启动子TATA盒区、如SEQ ID NO.:10所示的β-肌动蛋白启动子，以及如SEQ ID NO.:12所示的β-肌动蛋白内含子区。

10.一种含有如权利要求1所述的杂合启动子以及与其可操作连接的目标蛋白编码基因的重组载体。

11.如权利要求10所述的重组载体，还包括一个或多个选自下组的表达调控元件：复制起点、选择标记、报告基因、终止子或其组合。

12.如权利要求11所述的重组载体，其特征在于，所述的选择标记为药物抗性基因。

13.如权利要求12所述的重组载体，其特征在于，所述的药物抗性基因是耐受选自下组的抗生素的基因：氨苄西林、链霉素、庆大霉素、卡那霉素、潮霉素、四环素、氯霉素以及新霉素。

14.如权利要求11所述的重组载体，其特征在于，所述的报告基因为编码选自下组蛋白的基因：绿色荧光蛋白(GFP)、青色荧光蛋白(CFP)、黄色荧光蛋白(YFP)、红色荧光蛋白(dsRFP)、荧光素酶(Luc)、氯霉素乙酰转移酶(CAT)、β-半乳糖苷酶(LacZ)以及β-葡萄糖醛酸酶(Gus)。

15.一种转化体，其中如权利要求10所述的重组载体引入宿主细胞。