[发明专利]单萜烯糖基转移酶的利用方法

说明书

技术领域

本发明涉及单萜烯8-位糖苷的制造方法、高表达单萜烯8-位糖基转移酶的转化体以及根据所述方法制作的单萜烯的8-位糖苷及其应用。此外，本发明也涉及使具有使单萜烯化合物的8-位糖基化活性的蛋白质的表达被抑制的植物及其应用。 

背景技术

萜类化合物，特别是单萜烯(C10)、倍半萜烯(C15)等分子量较小的萜类是植物的主要香气成分，不仅广泛地用于食品、酒类的赋香，还广泛地用于化妆品、香水等工业产品。已知由芳樟醇所代表的单萜烯在植物细胞内合成，然而，其一部分作为糖苷蓄积，例如，已报道的有十字花科拟南芥(Arabidopsis thaliana)中的8-位羟基化芳樟醇的糖苷(非专利文献1)。已知不仅是模式植物，作为工业上重要作物的大麻科的啤酒花(Humulus lupulus)(非专利文献2)、山茶科的茶(Camellia sinensis)(非专利文献3-6)、姜科的姜(Zingiber officinale)(非专利文献7)等中也蓄积有单萜烯糖苷。进而，由于在植物界中已有广泛报道(非专利文献8)，故而认为糖苷是作为香气成分前体的通常的方式。利用酶或非酶的方法将作为香气前体物质的萜烯糖苷的糖切除，并且如使香气成分挥发的人工控制，从工业应用的观点出发也已开始被研究(非专利文献9)。 

然而，迄今为止，可切断单萜烯糖苷的糖的酶(β-樱草糖苷酶(β-primeverosidase))已从茶中分离(非专利文献10)，但是将糖附加在单萜烯(糖基化)的分子机制仍不清楚。虽然通过拟南芥的UDP葡萄糖基转移酶(UDP-sugar dependent glycosyltransferase：UGT)的全面的活性筛选，有一部分的UGT酶在试管内与单萜烯反应，但是并未显示出生理性功能、或其活性的意义(非专利文献11)。由于芸香科的甜橙(Citrus sinensis)中也蓄积有单萜烯糖苷，所以进行了针对单萜烯的UGT的筛选，然而未成功鉴定出具有活性的 UGT酶基因(非专利文献12)。 

专利文献1：国际公开公报WO97/11184 

非专利文献1：Aharoni et al(2003)Plant Cell15,2866-2884 

非专利文献2：Kollmannsberger et al(2006)Mschr.Brauwissenschaft59,83-89 

非专利文献3：Guo et al(1994)Biosci.Biotech.Biochem.58,1532-1534 

非专利文献4：Nishikitani et al(1996)Biosci.Biotech.Biochem.60,929-931 

非专利文献5：Moon et al(1996)Biosci.Biotech.Biochem.60,1815-1819 

非专利文献6：Ma et al(2001)Phytochemisty56,819-825 

非专利文献7：Sekiwa et al(1999)Biosci.Biotech.Biochem.63,384-389 

非专利文献8：Winterhalter and Skouroumounis(1997)Adv.Biochem.Eng.Biotechnol.55,73-105 

非专利文献9：Herman(2007)Angew.Chem.Int.Ed.46,5836-5863 

非专利文献10：Mizutani et al(2002)Plant Physiol.130,2164-2176 

非专利文献11：Caputi et al(2008)Chem.Eur.J.14,6656-6662 

非专利文献12：Fan et al(2010)Genome53,816-823 

非专利文献13：Winter et al(2007)PLoS One2,e718 

非专利文献14：Hou et al(2004)J.Biol.Chem.279,47822-47832 

非专利文献15：Kristensen et al(2005)Proc.Natl.Acd.Sci.USA102,1779-1784 

非专利文献16：Franks et al(2008)Funct.Plant Biol.35,236-246 

发明内容