[发明专利]蛋白质的生产方法

权利要求书

1.一种生产目标蛋白质的方法，其中，将包含含有编码目标蛋白质的DNA的基因片段且在该基因片段的两端含有一对转座子序列的至少一种表达载体导入悬浮性哺乳动物细胞中，将插入在一对转座子序列之间的含有编码目标蛋白质的DNA的基因片段重组到该哺乳动物细胞的染色体中，得到生产该目标蛋白质的悬浮性哺乳动物细胞，并且对该哺乳动物细胞进行悬浮培养而生产该目标蛋白质。

2.一种生产目标蛋白质的方法，其特征在于，包括以下的步骤(A)～(C)：

(A)将以下的表达载体(a)和(b)同时导入悬浮性哺乳动物细胞中，

(a)包含含有编码目标蛋白质的DNA的基因片段且在该基因片段的两端含有一对转座子序列的至少一种表达载体，

(b)含有编码识别转座子序列且具有使插入在一对转座子序列之间的基因片段转移到染色体上的活性的转座酶的DNA的载体；

(B)利用步骤(A)中导入到悬浮性哺乳动物细胞中的表达载体(b)使转座酶暂时性表达，将插入在一对转座子序列之间的含有编码目标蛋白质的DNA的基因片段重组到该哺乳动物细胞的染色体中而得到表达目标蛋白质的悬浮性哺乳动物细胞；以及

(C)对步骤(B)中得到的表达目标蛋白质的悬浮性哺乳动物细胞进行悬浮培养而生产目标蛋白质。

3.一种得到生产目标蛋白质的悬浮性哺乳动物细胞的方法，其中，将包含含有编码目标蛋白质的DNA的基因片段且在该基因片段的两端含有一对转座子序列的至少一种表达载体导入悬浮性哺乳动物细胞中，将插入在一对转座子序列之间的含有编码目标蛋白质的DNA的基因片段重组到该哺乳动物细胞的染色体中，得到生产该目标蛋白质的悬浮性哺乳动物细胞。

4.如权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，包含含有编码目标蛋白质的DNA的基因片段且在该基因片段的两端含有一对转座子序列的表达载体的至少一种为包含含有编码目标蛋白质的DNA和选择标记基因的基因片段且在该基因片段的两端含有一对转座子序列的表达载体。

5.如权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，除了将包含含有编码目标蛋白质的DNA的基因片段且在该基因片段的两端含有一对转座子序列的表达载体导入哺乳动物细胞中之外，还将在包含选择标记基因的基因片段的两端含有一对转座子序列的表达载体导入哺乳动物细胞中。

6.如权利要求1～5中任一项所述的方法，其中，编码目标蛋白质的DNA为编码抗体的DNA。

7.如权利要求6所述的方法，其中，编码抗体的DNA为编码抗体的H链的DNA和编码抗体的L链的DNA中的至少一种。

8.如权利要求4～7中任一项所述的方法，其中，将选自下述(a)～(d)的表达载体导入悬浮性哺乳动物细胞中，

(a)包含含有编码抗体的H链的DNA的基因片段且在该基因片段的两端含有一对转座子序列的表达载体、包含含有编码抗体的L链的DNA的基因片段且在该基因片段的两端含有一对转座子序列的表达载体以及包含含有选择标记基因的基因片段且在该基因片段的两端含有一对转座子序列的表达载体；

(b)包含含有编码抗体的H链的DNA和选择标记基因的基因片段且在该基因片段的两端含有一对转座子序列的表达载体以及包含含有编码抗体的L链的DNA的基因片段且在该基因片段的两端含有一对转座子序列的表达载体；

(c)包含含有编码抗体的L链的DNA和选择标记基因的基因片段且在该基因片段的两端含有一对转座子序列的表达载体以及包含含有编码抗体的H链的DNA的基因片段且在该基因片段的两端含有一对转座子序列的表达载体；

(d)包含含有编码抗体的H链、L链和选择标记基因的DNA的基因片段且在该基因片段的两端含有一对转座子序列的表达载体。

9.如权利要求1～8中任一项所述的方法，其中，悬浮性哺乳动物细胞为能够在无血清培养条件下存活和增殖的细胞。

10.如权利要求1～9中任一项所述的方法，其中，悬浮性哺乳动物细胞为选自将CHO细胞在悬浮培养中驯化而得到的悬浮性CHO细胞、PER.C6细胞、大鼠骨髓瘤细胞YB2/3HL.P2.G11.16Ag.20(或者也称为YB2/0)和在悬浮培养中驯化而得到的悬浮性小鼠骨髓瘤细胞NS0中的任意一种细胞。