[发明专利]能够使甘露糖-1-磷酸-6-甘露糖连接脱帽并使磷酸化的N-聚糖脱甘露糖基化的甘露糖苷酶及促进糖蛋白的哺乳动物细胞摄取的方法

权利要求书

1.一种在糖蛋白上使甘露糖-1-磷酸-6-甘露糖模块脱帽并使磷酸化N-聚糖脱甘露糖基化的方法，所述方法包括：

a)提供所述糖蛋白，该糖蛋白具有含有所述甘露糖-1-磷酸-6-甘露糖模块的磷酸化的N-聚糖；并

b)使所述糖蛋白与甘露糖苷酶接触，所述甘露糖苷酶作为单一酶(i)将甘露糖-1-磷酸-6-甘露糖模块水解成甘露糖-6-磷酸，并且(ii)水解末端alpha-1,2甘露糖、alpha-1,3甘露糖和/或alpha-1,6甘露糖连接，其中所述甘露糖苷酶是直生刀豆(Canavaliaensiformis)甘露糖苷酶。

2.一种使磷酸化的N-聚糖脱甘露糖基化的方法，所述方法包括：

a)提供包含磷酸化的N-聚糖的糖蛋白；并

b)使所述糖蛋白与甘露糖苷酶接触，所述甘露糖苷酶作为单一酶(i)将甘露糖-1-磷酸-6-甘露糖模块水解成甘露糖-6-磷酸，并且(ii)水解末端alpha-1,2甘露糖、alpha-1,3甘露糖和/或alpha-1,6甘露糖连接，其中所述甘露糖苷酶是直生刀豆(Canavaliaensiformis)甘露糖苷酶。

3.权利要求1-2中任一项的方法，其中所述直生刀豆甘露糖苷酶含有具有氨基酸序列NKIPRAGWQIDPFGHSAVQG(SEQ ID NO:12)的区段。

4.权利要求1-2中任一项的方法，所述方法进一步包括在步骤(a)和(b)后，使哺乳动物细胞与所述糖蛋白接触，所述糖蛋白包含所述脱甘露糖基化的磷酸化的N-聚糖，其中在所述接触后，所述糖蛋白转运到所述哺乳动物细胞的内部。

5.权利要求4的方法，其中所述哺乳动物细胞是人细胞。

6.一种将糖蛋白引导至哺乳动物细胞内部的方法，所述方法包括：

a)提供具有磷酸化的N-聚糖的糖蛋白，所述磷酸化的N-聚糖包含通过alpha 1,2连接与下层甘露糖残基结合的末端甘露糖残基，其中所述下层甘露糖在第6位被磷酸化，与所述下层甘露糖结合的磷酸根残基是脱帽的，且所述糖蛋白实质上不结合所述细胞上的甘露糖-6-磷酸受体；b)使所述糖蛋白与甘露糖苷酶接触，所述甘露糖苷酶作为单一酶在下层甘露糖被磷酸化时水解末端alpha-1,2甘露糖连接和使与甘露糖残基的第6位结合的磷酸根残基脱帽以生成脱甘露糖基化的糖蛋白，其中所述甘露糖苷酶是直生刀豆(Canavaliaensiformis)甘露糖苷酶，其中在所述脱甘露糖基化后的所述糖蛋白实质上结合所述细胞上的所述甘露糖-6-磷酸受体；并

c)使所述细胞与所述脱甘露糖基化的糖蛋白接触。

7.权利要求6的方法，其中所述直生刀豆甘露糖苷酶含有具有氨基酸序列NKIPRAGWQIDPFGHSAVQG(SEQ ID NO:12)的区段。

8.一种将糖蛋白从实质上不结合哺乳动物细胞上的甘露糖-6-磷酸受体的第一形式转化成实质上确实结合哺乳动物细胞上的甘露糖-6-磷酸受体的第二形式的方法，其中在所述第一形式中，所述糖蛋白包含一个或多个N-聚糖，该N-聚糖各自含有在第1位与在第6位含有磷酸根残基的下层甘露糖残基连接的一个或多个末端甘露糖残基，且所述磷酸根残基是脱帽的，所述方法包括使所述糖蛋白的所述第一形式与作为单一酶除去所述一个或多个末端甘露糖残基并使与甘露糖残基的第6位结合的磷酸根残基脱帽的甘露糖苷酶接触，其中所述甘露糖苷酶是直生刀豆(Canavalia ensiformis)甘露糖苷酶。

9.权利要求8的方法，其中所述直生刀豆甘露糖苷酶含有具有氨基酸序列NKIPRAGWQIDPFGHSAVQG(SEQ ID NO:12)的区段。