[发明专利]一种用于产生对抗病原体的持久免疫和保护的合成免疫原

说明书

本发明的领域

本发明涉及一种产生对抗病原体的长期持久的免疫和保护的合成的免疫原，以及其制备方法。本发明所开发的免疫原能够规避人体中HLA限制。本发明进一步涉及一种疫苗，其包含所述的产生对抗不同疾病的病原体的长期持久的免疫和保护的合成的免疫原。所述疫苗是针对细胞内的病原体，更特别是在本例中涉及的病原体是结核分枝杆菌（M.tuberculosis）。本发明的主题所述的病原体结核分枝杆菌是结核病的病原体。该疫苗也可用于对抗细胞内的病原体，这些病原体导致以下疾病：布氏杆菌病、利什曼病、李氏杆菌病、麻风病、疟疾、伤寒、锥虫病、链球菌的疾病、获得性免疫缺陷综合征（AIDS），该疫苗也可用于如癌症、过敏、自身免疫性疾病等。在本发明中，混杂的结核分枝杆菌的表位是共轭于Toll样受体（TLR）的配位体，以便将这些配位体靶向到抗原呈递细胞（APCs），特别是树突状细胞（DCs），并因此诱导持久的保护性免疫。

本发明的背景与现有技术描述

根据世界卫生组织（WHO）的报告（2000年），在1992年通过了关于100万新生儿和儿童接种卡介苗的世卫组织儿童基金会方案。虽然大多数全球人口接种卡介苗，但是每年仍约有300万人死于结核病。此外，大约有三分之一的世界人口仍然潜伏感染结核分枝杆菌。因此，作为唯一可用的疫苗，卡介苗是不可预测的和充满变数的。科学界已经对卡介苗接种的功效提出了质疑，因而急需针对结核分枝杆菌疫苗制定有效的手段。

不幸的是，艾滋病的额外问题以及多药耐药（MDR）结核分枝杆菌菌株的出现已加剧了结核病的全球性问题。此外，还出现了一个新的问题，即BCG在艾滋病毒感染者中的安全性问题。在接种BCG疫苗孩子的少数病例中已经报道了散发的BCG-杆菌，后来发现是HIV阳性（Von Reyn,et.al.Lancet1987:ii:669-672;Braun,et.al.,Pedietr.Infect.Dis.J.1992:11:220-227;Weltman,et.al.,AIDS7:1993:149)。WHO目前建议在显示明显的免疫缺陷迹象的儿童中停止使用BCG(世界卫生组织，Tuberculosis fact sheet number104，2002年8月）。

BCG已经在全球范围被广泛应用，尽管其强有力的应用，结核病仍然成为不仅在发展中国家而且在已开发的传播最快的疾病。人们日益关注它作为疫苗在对照试验中的可疑疗效（Bloom,B.R.et.al.,Annu.Rev.Immunol.10:1992:453）。此外，在印度Chenglepet完成的广泛的临床试验显示，在卡介苗接种和未接种的个体中显示出类似的保护程度，这表明它诱导零保护（Narayanan Indian J Med Res.2006,123(2):119-124）。因此，卡介苗接种显然不能阻止疾病传播。

卡介苗失灵的另一个原因是分枝杆菌在细胞内的位置。电子显微镜的研究结果表明，在体外感染巨噬细胞后，BCG基本上保持在吞噬溶酶体内，而致命的结核分枝杆菌（菌株H37Rv）能从吞噬溶酶体中逃脱，并进入细胞质（McDonough,et.al.,Infect.Immun.61:1993:2763）。这可能是与这样相关，即在抗原呈递细胞的内涵体隔室内的抗原是被呈递为结合对于CD4⁺T辅助细胞的MHC II类决定簇，而细胞质抗原是被呈递为结合对于CD8⁺细胞毒性T细胞（CTL）的主要组织相容性复合体（MHC）I类决定簇。这解释了为什么结核分枝杆菌是比BCG更依赖于它在MHC I类限制性CTL上的排除，这表明，BCG在诱导MHC I类限制性CTL方面并不是非常有效的（Stover,et.al.,Nature351:1991:456）。在Rich,1951,Kaufman et al2008一文中评论称，从感染结核分枝杆菌中的恢复比BCG提供了对抗未来肺结核的更强的保护。因此，有效对抗结核分枝杆菌感染将需要包括特定的裂解巨噬细胞的CD8⁺CTL或者实质细胞的参与，否则不能限制它们的感染，而且需要特定的CD4⁺T细胞，它们能产生IL-2、IFN-γ、TNF-α和其他参与巨噬细胞活化的淋巴因子。