[发明专利]硫酯酶及其用途

说明书

技术领域

公开了编码硫酯酶的核苷酸序列、产生它们的方法、它们在形成硫酯的方法中的用途。

背景

对于干酪、蔬菜、肉和咖啡产品等而言，硫酯是重要调味化合物。特别有用的硫酯包括但不限于硫代丁酸甲酯(下文称作“MTB”)、硫代乙酸甲酯(下文称作“MTA”)和硫代丙酸甲酯(下文称作“MTP”)。

可以合成地产生硫酯。然而，因为食品趋势和健康顾虑及福祉顾虑，对于从天然产物直接获得或通过生物学过程产的调味化合物(如硫酯)存在特殊需要。这类化合物的一个特殊优点是，可以将它们称作“天然”的并且可能在消费产品上这样标注。

已知多种细菌在发酵期间产生硫酯。然而，这些现有过程的产量和产物比率难以影响。

因此，将有益的是，开发更可预测和可能在经济上更有可行性的产生硫酯的方法，所述硫酯可能用于消费产品中并且标注为“天然的”。

详述

申请人现在已经鉴定编码硫酯酶的核苷酸序列。

这项研究结果使这些核苷酸序列能够用于以下方法中，其中所述方法能够高效地产生可以添加至消费产品并标记为“天然”的硫酯。另外，这些核苷酸序列可以用于鉴定能够形成硫酯的其他野生型细菌的筛选方法中。

根据第一个说明性实施方案，提供了编码具有硫酯酶活性的酶的核苷酸序列，所述核苷酸序列包含SEQ.ID.No.1、3、5和7中所公开的核苷酸序列或其功能等同物。

不限于并且仅以说明的方式，这些核酸可以从属于短杆菌属(Brevibacterium)家族的细菌分离。根据某些实施方案，这些核酸可以从属于扩展短杆菌(Brevibacterium linens)物种的细菌分离，一个非限制性实例是美国典型培养物保藏中心(下文称作ATCC)菌株9174(BL2)。

核苷酸序列的功能等同物包括这些核苷酸序列，其因遗传密码的简并性而拥有与本文中公开的那些核苷酸序列不同的核苷酸序列，但是编码具有相同活性的相同氨基酸序列。

功能等同物包括本文所述序列的天然存在变体以及合成核苷酸序列，例如，通过化学合成或天然存在的DNA重组所获得的那些核苷酸序列。功能等同物可以是天然或合成性置换、添加、缺失、替换或插入一个或多个核苷酸的结果。

功能等同物的实例包括这些核酸序列，它们包含因不导致多肽活性的改变并因此可以在功能上视为中性的至少一个保守氨基酸置换而产生的有义突变。

提供功能相似氨基酸的保守性置换表是本领域熟知的。例如，选择保守性置换的一个示例性指导包括(原始残基跟随示例性置换)：ala/gly或ser；arg/lys；asn/gln或his；asp/glu；cys/ser；gln/asn；gly/asp；gly/ala或pro；his/asn或gln；ile/leu或val；leu/ile或val；lys/arg或gln或glu；met/leu或tyr或ile；phe/met或leu或tyr；ser/thr；thr/ser；trp/tyr；tyr/trp或phe；val/ile或leu。替代的示例性指导使用以下6个组，每个组含有彼此互为保守性置换的氨基酸：1)丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)；2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)；3)天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)；4)精氨酸(R)、赖氨酸(1)；5)异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、缬氨酸(V)；和6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)。另一个的示例性指导是允许全部带电荷的氨基酸彼此作为保守性置换，无论它们是否带正电荷或带负电荷。

在编码序列中改变、添加或缺失单个氨基酸或小百分比(例如至多到26%、至多到20%、至多到10%或至多到5%)的氨基酸的单个置换、缺失或添加还视为功能等同物。

功能等同物的其他非限制性的实例包括片段、直向同源物、剪接变体、单核苷酸多态性和等位变体。

这类功能等同物将与本文中公开的核苷酸序列具有60%、75%、80%、90%、95%或更大的同源性。

核苷酸序列同源性可以通过序列同一性或通过杂交确定。

序列同一性可以使用基本局部比对搜索工具技术(下文称作BLAST)确定。BLAST技术是由可在http://www.ncbi.nlm.nih.gov获得的程序blastn使用的启发式检索算法。

如果通过杂交确定同源性，则应当将这些核苷酸序列视为基本上同源的，前提是它们能够选择性地杂交至本文中公开的核苷酸序列。