[发明专利]用于分析受试者血样中疾病标记物的存在的方法

说明书

技术领域

本发明属于医疗诊断领域，具体地属于疾病诊断和监测领域。本发明涉及一种用于检测疾病的标记物，涉及一种用于检测疾病的方法，以及涉及一种用于确定疾病治疗疗效的方法。

背景技术

在临床实践中，强烈需求能够在疾病早期阶段检测疾病以预测疾病的进展，并进行为病人定制的治疗。特别是肿瘤性疾病(癌症)的早期发现是至关重要的，以确保疾病的有利治疗。尽管医学研究中的许多进展，癌症仍然是全球死亡的一个重要原因。当患者求医时，他们一般都表现出远处转移症状，意为往往发现癌症为时已晚。

肺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌是最常见的肿瘤，并为了通过手术切除、放疗、化疗或其他已知的治疗方法有利于适当的补救行动，需要快速且简单的用于癌症的早期诊断的方法。同样重要的是用于癌症的好诊断方法的可用性以评估患者对治疗的反应，或评估由于在原来位置的再生或转移的复发。

目前已知几种类型的癌症标记物，例如，癌基因产物、生长因子和生长因子受体、血管生长因子、蛋白酶、粘附因子和肿瘤抑制基因产物等，它们不仅被认为对于早期诊断是必要的，而且对于不明确的临床异常情况的患者的区别诊断也是必要的，例如区分恶性和良性异常情况；预测已确定恶性的具体患者对选择的治疗方法的治疗可能的反应；以及提供与人或动物受试者中恶性的风险、存在、状态，或未来的行为有关的信息。目前，通过检测肿瘤或癌症标记物来检测和诊断癌症的能力是广泛关注的领域，并因此存在对在患者标本中鉴定新的和更有用的肿瘤标记物的可重复的和可靠的方法的需求。

胶质母细胞瘤是最常见的和最恶劣的人类原发性脑肿瘤类型。部分地由于阻碍了治疗药物的传递和潜在的重要的诊断标记物的检测的血脑屏障，该疾病很难诊断并且治疗甚至更难。胶质母细胞瘤的诊断标记物是可获得的，但只针对肿瘤组织本身并且需要肿瘤样品。

为在早期阶段检测癌症并跟进疾病的进展，需要改进的筛选和检测方法。在癌症的情况下，我们的状态下，我们不仅需要检测肿瘤，而且还需要在它已达到不可返回的点之前检测它，此时治疗成为姑息治疗而非治愈性治疗。高危人群以及具有复发性癌症的患者，应广泛进行监控。此外，因为肿瘤对不同的治疗方法能有不同的反应，病人分层变得非常重要。

使用肿瘤活检的遗传分析已经允许对癌症的诊断和新兴的病人分层策略有用的许多突变的鉴定。然而，当前肿瘤的遗传分析的缺点是需要肿瘤活检，这往往不可能解剖患者。此外，使用的活检是静态的，并且不允许遗传监测随时间推移的肿瘤恶化或复发。而且，许多肿瘤是异质的，从而导致这类肿瘤活检的潜在的假阳性或假阴性的遗传特性。

最近，将循环肿瘤细胞用于肿瘤进展或复发的诊断和监测表明将血液用作肿瘤来源的材料源，特别是细胞形式的组织碎片。然而，循环肿瘤细胞的使用对于大多数癌症是无效的。

一般情况下，疾病标记物定义为，与正常健康受试者比较时，患病患者的生物流体中浓度改变，优选浓度升高的化合物，并且其随后可用作表明疾病的标记物化合物。然而，在多种体液中作为疾病例如癌症的标记物的具体化合物例如蛋白质的鉴定，已经由缺乏其合适的技术而受到阻碍。

另外，在癌症以外的疾病的情况下，标记物可以利用但难以检测。这阻碍疾病的早期诊断。

本发明旨在克服现有技术的问题：并非所有患病组织或疾病类型(例如肿瘤)都产生循环患病细胞(例如循环肿瘤细胞)。本发明还旨在克服用于检测疾病例如癌症的蛋白质标记物难以检测的问题。另外，本发明旨在提供不需要活检并允许广泛监测患者的方法。

发明内容

本发明的第一方面提供一种分析受试者血样中疾病标记物的存在的方法。所述方法包括下述步骤：a)从所述血样的无核血细胞，优选凝血细胞(thrombocyte)中提取核酸，以提供无核血细胞提取的核酸片段(fraction)，以及b)分析所述无核血细胞提取的核酸片段中疾病标记物的存在，其中，所述疾病标记物是所述受试者的有核细胞的基因中的疾病特异突变，或其中所述疾病标记物是所述受试者的有核细胞的基因的疾病特异表达谱(expression profile)。

本文使用的术语“无核血细胞”指没有细胞核的细胞。该术语包括对红细胞和凝血细胞的引用。在本发明各方面中无核细胞的优选实施方式是凝血细胞。术语“无核血细胞”优选不包括对作为错误的细胞分裂的结果而没有细胞核的细胞的引用。